c-Met基因表達(dá)與胃癌細(xì)胞MKN-45對EGFR-TKI敏感性的研究.pdf

1、背景和目的：胃癌是EGFR過表達(dá)的腫瘤，但目前研究顯示胃癌對EGFR-TKI不敏感，可能存在酪氨酸激酶抑制劑的原發(fā)耐藥。在非小細(xì)胞肺癌中非靶受體c-Met繼發(fā)性過表達(dá)與吉非替尼的繼發(fā)性耐藥有關(guān)。c-Met過表達(dá)在胃癌中較為常見，目前有研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞生長因子拮抗劑NK4可以提高吉非替尼在胃癌細(xì)胞中的敏感性。提示c-Met的異常表達(dá)可能影響了胃癌對EGFR-TKIs的敏感性。本研究以EGFR與c-Met過表達(dá)且無EGFR突變的胃癌細(xì)胞株MK

2、N-45為研究對象，探索能否通過改變胃癌細(xì)胞的c-Met基因表達(dá)狀態(tài)來改變其對吉非替尼的敏感性，本研究結(jié)果可為是否采用吉非替尼與c-Met抑制劑聯(lián)合治療胃癌提供依據(jù)。
　　 材料與方法：1、人胃癌細(xì)胞MKN-45獲贈于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室，置于37℃、5％C02、濕度為80％的培養(yǎng)箱中用含有10％胎牛血清的DMEM（高糖）完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。從Genebank基因數(shù)據(jù)庫獲得c-Met基因序列，設(shè)計3條c-Me t-si RN

3、A序列，委托上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司采用化學(xué)合成法合成。2、通過脂質(zhì)體LipofectaminTM2000介導(dǎo)，將3條c-Met-siRNA序列轉(zhuǎn)入人胃癌細(xì)胞MKN-45中，并設(shè)置陰性對照組、LipofectaminTM2000組和空白對照組。3、轉(zhuǎn)染48h后，利用適時定量PCR(real time-PCR，RT-PCR)方法檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌MKN-45細(xì)胞c-Met基因mRNA的變化;利用Western-Blot方法檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌M

4、KN-45細(xì)胞c-Met蛋白的變化;利用AnnexinV和PI雙染流式檢測RNA干擾對細(xì)胞凋亡的影響。利用MTT法檢測胃癌細(xì)胞MKN-45對吉非替尼的IC50。4、采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較利用單因素ANONA分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1、轉(zhuǎn)染48h后， RT-PCR和Western-Blot方法檢測轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞MKN-45

5、 c-Met基因的mRNA和蛋白表達(dá)較三個對照組均明顯下降(P＜0.05)。2、轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞MKN-45凋亡率明顯增加（P＜0.05)。3、轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞MKN-45對吉非替尼的IC50未明顯降低（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：1、利用RNA干擾技術(shù)可成功下調(diào)胃癌MKN-45細(xì)胞中的c-Met基因的表達(dá)。2、胃癌細(xì)胞MKN-45轉(zhuǎn)染c-Met-siRNA成功后可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3、沉默c-Met基因未能改善胃癌細(xì)胞MKN-45對