姜黃素及其衍生物C086體外抗慢性粒細(xì)胞白血病作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究姜黃素及其衍生物C086在體外的抗依馬替尼敏感和耐藥慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的作用,探討藥物對白血病細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用與線粒體凋亡途徑的關(guān)系
　　方法:(1)四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法體外檢測C086對白血病細(xì)胞K562及耐IM的白血病細(xì)胞K562/G01細(xì)胞的增殖抑制作用。(2)通過AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測C086及Cur對白血病細(xì)胞的凋亡作用。(3)采用JC-1染色法檢測C086及Cur對白血病細(xì)胞作用

2、后,對線粒體膜電位的影響。(4)通過PI染色法測定細(xì)胞周期改變。(5)對細(xì)胞進(jìn)行CFSE染色后,測定C086及Cur對細(xì)胞的分裂增殖的抑制作用。(6)臺盼藍(lán)排染法測定C086及Cur對白血病患者CD34+細(xì)胞的殺傷作用。(7)集落形成法測定C086及Cur對白血病患者CD34+細(xì)胞集落形成能力的抑制作用。(8)通過長期培養(yǎng)體系檢測C086及Cur對白血病患者長期啟動細(xì)胞(LTC-IC)的抑制作用。(9)應(yīng)用蛋白免疫印跡法檢測線粒體凋亡相

3、關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)C086呈劑量依賴性的抑制K562和K562/G01細(xì)胞的增殖,24h的IC50分別為3.19μmol·L-1和1.72μmol·L-1。(2)C086及Cur可誘導(dǎo)K562和K562/G01細(xì)胞凋亡,且隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞凋亡率增加。(3)C086及Cur作用白血病細(xì)胞后,線粒體膜電位發(fā)生明顯的變化,線粒體膜電位耗散程度增加。(4)C086及Cur可以顯著影響細(xì)胞周期進(jìn)程,阻滯白血病細(xì)胞周期于

4、G2/M期。(5)C086可明顯抑制白血病細(xì)胞的分裂增殖能力。(6)C086及Cur均表現(xiàn)出對白血病患者的CD34+細(xì)胞的抑制作用。(7)C086及Cur對白血病患者CD34+祖/干細(xì)胞的集落形成能力有明顯的抑制作用。(8)C086可明顯的抑制CML患者白血病干細(xì)胞的自我更新能力,有效抑制LTC-IC。(9)C086及Cur通過線粒體caspase-9/caspase-3途徑誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:姜黃素及其衍生物C086