脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)對(duì)體外新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)對(duì)體外新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響及可能機(jī)制。
　　方法：取新生3天以內(nèi)SD大鼠側(cè)腦室的神經(jīng)干細(xì)胞，在無血清條件下培養(yǎng)2周，后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。將實(shí)驗(yàn)組置于脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)實(shí)驗(yàn)裝置內(nèi)，用前期研究獲得的促增殖參數(shù)（0.1HZ，4T，8次）進(jìn)行干預(yù)處理，對(duì)照組置于相同條件下不行干預(yù)刺激。干預(yù)后24小時(shí)，兩組神經(jīng)干細(xì)胞均更換為含10％胎牛血清的培養(yǎng)基以誘導(dǎo)貼壁分化。貼壁分化后第7天，采用免疫熒光染色、RT-PCR技術(shù)

2、、western blot分別檢測(cè)兩組神經(jīng)干細(xì)胞分化后神經(jīng)元特異性標(biāo)志物 TUJ1、星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志物GFAP表達(dá)情況。并采用RT-PCR及Western blot技術(shù)進(jìn)一步檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)分子 Dvl1、β-catenin、GSK-3β、Tcf-4、CyclinD1、c-myc的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：神經(jīng)干細(xì)胞干預(yù)后貼壁分化第7天，免疫熒光染色結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組TUJ1陽性細(xì)胞表達(dá)

3、率較對(duì)照組增多，GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)率較對(duì)照組減少；RT-PCR及Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組TUJ1基因表達(dá)較對(duì)照組增多，GFAP較對(duì)照組降低。Western Blot結(jié)果與RT-PCR結(jié)果基本一致。進(jìn)一步的RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組wnt/β-catenin通路相關(guān)信號(hào)分子Dvl1、β-catenin、Tcf-4、CyclinD1、c-myc表達(dá)均較對(duì)照組增高，而GSK-3β較對(duì)照組減少。<

4、br>　　結(jié)論：脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)具有抑制神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化，并促進(jìn)其向神經(jīng)元定向分化的作用；脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)作用后的NSCs分化過程中存在wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，初步提示wnt/β-catenin信號(hào)通路在脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)促NSCs分化過程中可能起作用。
　　第一部分脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響
　　目的:探討脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)對(duì)體外新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）分化的影響。
　　方法:取新生3天以內(nèi)SD大鼠側(cè)腦

5、室的神經(jīng)干細(xì)胞，在無血清條件下培養(yǎng)2周，后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。將實(shí)驗(yàn)組置于脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)實(shí)驗(yàn)裝置內(nèi)，用前期研究獲得的促增殖參數(shù)（0.1HZ，4T，8次）進(jìn)行干預(yù)處理，對(duì)照組置于相同條件下不行干預(yù)刺激。干預(yù)后24小時(shí)，兩組神經(jīng)干細(xì)胞均更換為含10%胎牛血清的培養(yǎng)基以誘導(dǎo)貼壁分化。貼壁分化后第7天，采用免疫熒光染色、RT-PCR、western blot技術(shù)檢測(cè)兩組神經(jīng)干細(xì)胞分化后神經(jīng)元（TUJ1）及星形膠質(zhì)細(xì)胞（GFAP）相關(guān)特異性標(biāo)志物

6、的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:神經(jīng)干細(xì)胞干預(yù)后貼壁分化第7天，免疫熒光染色示實(shí)驗(yàn)組TUJ1陽性細(xì)胞率（33.4%±5.1%）較對(duì)照組（26.5%±7.0%）增多，實(shí)驗(yàn)組 GFAP陽性細(xì)胞率（23.9%±5.0%）較對(duì)照組（36.2%±2.2%）減少(P<0.05)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的TUJ1基因表達(dá)增多，GFAP表達(dá)降低。Western Blot結(jié)果示：實(shí)驗(yàn)組TUJ1的蛋白表達(dá)量（0.729±0.061）較

7、對(duì)照組（0.365±0.049）增多，GFAP的蛋白表達(dá)量（0.566±0.056）較對(duì)照組（1.034±0.051）減少。
　　結(jié)論:脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)具有促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化，并抑制其向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的作用。
　　第二部分探討脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)促神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的可能機(jī)制
　　目的：探討wnt/β-catenin信號(hào)通路在脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)促體外新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞定向分化中的可能作用。
　　方法：取新生3天以內(nèi)SD大鼠雙側(cè)

8、側(cè)腦室的神經(jīng)干細(xì)胞，在無血清條件下培養(yǎng)2周，后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。將實(shí)驗(yàn)組置于脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)實(shí)驗(yàn)裝置內(nèi)，用前期研究獲得的促增殖參數(shù)（0.1HZ，4T，8次）進(jìn)行干預(yù)處理，對(duì)照組置于相同條件下不行干預(yù)刺激。干預(yù)后24小時(shí)，兩組神經(jīng)干細(xì)胞均更換為含10%胎牛血清的培養(yǎng)基以誘導(dǎo)貼壁分化。貼壁分化后第7天，通過western blot及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞分化后wnt通路相關(guān)信號(hào)分子Dvl1、β-catenin、GSK-3β、Tcf-

9、4、CyclinD1、c-myc的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組wnt信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)分子Dvl1、β-catenin、Tcf-4、CyclinD1均較對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western Blot結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組wnt通路相關(guān)信號(hào)分子β-catenin、c-myc表達(dá)均較對(duì)照組增高，而GSK-3β較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)作用后的NSCs分化過程中存在wnt/β-cat