版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:研究葉酸(folic acid)對體外缺氧新生SD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)Notch信號通路相關(guān)基因mRNA和蛋白表達(dá)的影響,在分子水平上探討葉酸促進(jìn)腦缺血缺氧損傷神經(jīng)修復(fù)的作用及其機(jī)制。
方法:通過機(jī)械吹打法獲得24h新生SD大鼠腦NSCs,利用含有bFGF和EGF因子的無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞,獲得NSCs并分為5組:①正常對照組(Controlgroup)葉酸濃度為4μg/ml;②缺氧模型組(Hypoxia mo
2、del group)葉酸濃度為4μg/ml;③缺氧葉酸低劑量組(Hypoxia+folic acid L group)葉酸濃度為8μg/ml;④缺氧葉酸高劑量組(Hypoxia+folic acid H group)葉酸濃度為44μg/ml;⑤缺氧葉酸缺乏組(Hypoxia+folic acid D group)葉酸劑量為0.65μg/ml;于增殖第3d將除正常對照組外的其他4組細(xì)胞進(jìn)行缺氧培養(yǎng),8h后取出,繼續(xù)培養(yǎng)至第7d收集增殖期細(xì)
3、胞;于增殖第7d,添加胎牛血清使細(xì)胞分化,繼續(xù)培養(yǎng)至第13d,收集分化期細(xì)胞。用臺盼藍(lán)染色計數(shù)缺氧損傷后的各組細(xì)胞密度;提取各組細(xì)胞總RNA進(jìn)行RT-PCR,采用實時定量SYBR Green I-PCR方法,檢測各組NSCsNotch信號通路相關(guān)基因(Notch1、Hes1、Hes5、Neurogenin1、Neurogenin2、Mash1)mRNA表達(dá);采用Western blot方法檢測各組NSCs Notch信號通路相關(guān)蛋白(N
4、otch1、Hes1、Hes5)表達(dá)。
結(jié)果:經(jīng)37℃,5%CO2、1%O2、94%N2條件缺氧8h后,NSCs形態(tài)及計數(shù)上都顯示出損傷跡象,成功建立體外新生SD大鼠NSCs缺氧損傷模型。臺盼藍(lán)染色計數(shù)活細(xì)胞密度結(jié)果顯示,缺氧模型組與其余四組差異有統(tǒng)計學(xué)意義,缺氧葉酸高劑量組最高、缺氧葉酸缺乏組最低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。熒光定量PCR方法測定各組NSCs內(nèi)Notch信號通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)變化結(jié)果發(fā)現(xiàn),補(bǔ)充葉酸能上調(diào)
5、Notch1、Hes1/5基因的表達(dá),正常對照組于增殖第7d、分化第7d三種基因mRNA相對表達(dá)量均高于缺氧模型組,缺氧葉酸高劑量組于增殖第7d、分化第7d三種基因mRNA相對表達(dá)量均高于缺氧模型組;另外本實驗還發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充葉酸能下調(diào)Mash1、Neurgenin1/2基因的表達(dá),增殖第7d和分化第7d缺氧模型組Mash1、Neurgenin1/2 mRNA相對表達(dá)量均高于葉酸補(bǔ)充組,缺氧葉酸低劑量組高于缺氧葉酸高劑量組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義
6、。Western blot方法測定各組NSCs內(nèi)Notch信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示,增殖第7d,Notch1、Hes1/5蛋白,正常對照組表達(dá)量均高于缺氧模型組,缺氧葉酸高劑量組表達(dá)量最高,缺氧葉酸低劑量組表達(dá)量最低;分化第7d,各組NSCsNotch1、Hes5蛋白表達(dá)量均較增殖第7d有所下降,Hes1蛋白表達(dá)量則較增殖第7d有所增加,但三種蛋白表達(dá)具有相似之處,即正常對照組高于缺氧模型組,缺氧葉酸高劑量組高于其他各組,缺氧葉酸
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 葉酸對體外缺氧新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf
- 葉酸通過MAPK通路對體外缺氧神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用的研究.pdf
- 葉酸對神經(jīng)干細(xì)胞Notch和MAPK信號通路相關(guān)基因及蛋白表達(dá)作用的研究.pdf
- 維甲酸和葉酸通過Notch信號通路影響神經(jīng)干細(xì)胞的分化研究.pdf
- 葉酸對體外神經(jīng)干細(xì)胞分化作用機(jī)制的研究.pdf
- 葉酸通過MAPK信號通路對神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化作用的研究.pdf
- Notch信號通路參與bFGF對神經(jīng)干細(xì)胞輻射損傷保護(hù)作用的實驗研究.pdf
- 缺氧對新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響.pdf
- γ-分泌酶抑制劑DAPT封閉Notch信號途徑對新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化影響的體外研究.pdf
- Notch信號通路在神經(jīng)干細(xì)胞分化過程中的調(diào)節(jié)作用研究.pdf
- 缺氧預(yù)處理對大鼠神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)源性保護(hù)作用的體外實驗研究.pdf
- 褪黑素對體外腦缺氧模型中神經(jīng)干細(xì)胞的作用及機(jī)制研究.pdf
- 大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞特性及其Wnt和Notch信號通路調(diào)控機(jī)制的研究.pdf
- 新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 脈沖強(qiáng)磁場對體外新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響及機(jī)制研究.pdf
- 維甲酸對新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞-前體細(xì)胞體外分化的影響.pdf
- PKC-ERK信號通路在丙泊酚調(diào)控新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的作用研究.pdf
- 大鼠胚胎神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)研究.pdf
- 應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)研究葉酸對體外缺氧胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá).pdf
評論
0/150
提交評論