人精子中芳香化酶表達(dá)與精子功能的關(guān)系.pdf

1、不育癥將成為僅次于腫瘤和心血管病的危害人們身心健康的第三大疾病。因此，盡快探明導(dǎo)致不育癥的相關(guān)因素，對(duì)于生殖醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)理論與臨床的診斷治療都具有非常重要的意義?！　》枷慊甘切奂に睾铣纱萍に剡^(guò)程中的關(guān)鍵酶，它由細(xì)胞色素P450芳香化酶(P450arom)和NADPH-細(xì)胞色素P450還原酶兩種成分組成。本研究擬采用RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)，分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)人精子中P450arom的表達(dá)，以人精子穿透去透明帶金黃地鼠卵試驗(yàn)

2、(SPA)檢測(cè)精子受精力，以三色法染色評(píng)價(jià)精子頂體反應(yīng)發(fā)生率。通過(guò)分析精子中的P450arommRNA總體水平及P450arom蛋白陽(yáng)性精子百分率分別與受精率、頂體反應(yīng)率的相關(guān)性，并比較正常男性與不育男性精子中芳香化酶表達(dá)的差異，探討P450arom表達(dá)對(duì)于實(shí)現(xiàn)正常精子功能的意義，及其異常表達(dá)與男性不育癥發(fā)生的關(guān)系?！　?shí)驗(yàn)用精液標(biāo)本分別來(lái)自精液常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)符合正常標(biāo)準(zhǔn)，已證實(shí)有生育力的男性和不明原因不育癥患者。精液標(biāo)本液化后，采用P

3、ercoll密度梯度分離精子。將分離到的精子提取總RNA進(jìn)行RT-PCR，并以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)對(duì)照。分別測(cè)定P450arom和GAPDH條帶的光密度值，并以二者的光密度比值(P450arom/GAPDH比值)代表每份精液標(biāo)本中芳香化酶mRNA的總體水平?！　?duì)精子行間接免疫熒光染色后，以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P450arom蛋白表達(dá)陽(yáng)性的精子百分率。　　綜上，本研究從核酸和蛋白質(zhì)水平證明了精子中P450arom的表