基于流式細(xì)胞術(shù)評估人精子功能的初步研究.pdf

1、目的:通過對比流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡兩種檢測熒光染色的方法，探討流式細(xì)胞儀檢測人精子質(zhì)膜完整、DNA碎片指數(shù)、線粒體活性和頂體完整的可行性，并探討流式細(xì)胞儀PI/RH123聯(lián)合染色法檢測精子質(zhì)膜完整和線粒體活性的可行性。
　　方法:選擇2015年9月-11月在廣西醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)療中心門診就診的不孕夫婦，男方精液常規(guī)分析結(jié)果在WHO第5版正常范圍內(nèi)的精液標(biāo)本共120份，按染色方法隨機(jī)分成A、B兩組，A組:單染組(60份)

2、，使用碘化丙啶(PI)染色檢測精子質(zhì)膜完整、吖啶橙(AO)染色檢測DNA碎片指數(shù)、羅丹明123(RH123)染色檢測線粒體活性和異硫氰酸熒光素標(biāo)記的花生凝集素(FITC-PNA)染色檢測頂體完整。染色后將標(biāo)本隨機(jī)分為A1組和A2組各30份，分別使用流式細(xì)胞儀(FCM)和熒光顯微鏡(MIC)檢測，比較兩組檢測結(jié)果，評估流式細(xì)胞儀單染的可行性;B組:PI/RH123雙染組，使用PI單染檢測精子的質(zhì)膜完整、RH123單染檢測線粒體活性作為對照

3、，使用PI/PH123聯(lián)合雙染檢測精子質(zhì)膜完整與線粒體活性。染色后將標(biāo)本隨機(jī)分為B1組和B2組各30份，分別使用流式細(xì)胞儀(FCM)和熒光顯微鏡(MIC)檢測，比較兩組檢測結(jié)果，評估流式細(xì)胞儀PI/RH123雙染的可行性。
　　結(jié)果:1.A1組FCM單染和A2組MIC單染的結(jié)果比較:A1組和A2組檢測精子質(zhì)膜完整率分別為76.2±9.70％、73.88±8.40％，DNA碎片指數(shù)(DFI)分別為9.89±10.37％和10.02±

4、7.56％，線粒體活性分別為66.67±19.88％、69.20±9.04％，頂體完整率為80.88±23.56％、83.69±6.70％，A1組和A2組結(jié)果比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);
　　2.B組PI/RH123雙染組的單染和雙染結(jié)果比較:PI、PI/RH123檢測質(zhì)膜完整的結(jié)果比較，B1組分別為70.08±10.25、69.86±9.80，B2組分別為68.74±9.18、67.84±12.02，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義(P＞0.05);RH123、PI/RH123檢測線粒體活性的結(jié)果比較，B1組分別為55.69±12.82、49.39±13.13，B2組分別為57.14±10.47、55.04±9.25，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);
　　3.B1組FCM雙染和B2組MIC雙染的結(jié)果比較:PI/RH123染色結(jié)果PI-/RH123+、PI-/RH123-、PI+/RH123-，B1組分別為49.39±13.13、20.47±10.47

6、、24.67±15.00，B2組分別為49.15±9.62、18.69±13.27、26.27±12.74，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);
　　4.精子質(zhì)膜完整與精子總活力、前向運(yùn)動均呈正相關(guān)性，DFI與前向運(yùn)動呈負(fù)相關(guān)性，線粒體活性與前向運(yùn)動呈正相關(guān)性，p均＜0.05;5.精子質(zhì)膜完整與線粒體活性正相關(guān)(p＜0.05)，與DFI、頂體完整無明顯相關(guān)性(P＞0.05); DFI與線粒體活性負(fù)相關(guān)(p＜0.05)，與頂體完整無