不同培養(yǎng)代數(shù)和接種密度骨髓間質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文不同培養(yǎng)代數(shù)和接種密度骨髓間質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究姓名：袁正兵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：高梁斌20070501廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文不同培養(yǎng)代數(shù)和接種密度骨憾間質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究方法IMSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：應(yīng)用Percoll細(xì)胞分離液對(duì)兔骨髓行密度離心，分離得到MSCs并傳代，觀察各代MSCs生長(zhǎng)狀況；取第四代MSCs行成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察MSCs在成骨分化條件下的生長(zhǎng)狀況

2、，分別行改良的Kaplow法染色和改良的YonKossa法染色，檢測(cè)MSCs成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)后堿性磷酸酶的表達(dá)和鈣化節(jié)結(jié)的形成。2第1—5代MSCs增殖能力檢測(cè)：應(yīng)用四唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)第l一5代MSCs傳代培養(yǎng)后各時(shí)間點(diǎn)的oD值，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較各代MSCs的增殖能力。3第l一5代MSCs成骨分化能力檢測(cè)：應(yīng)用堿性磷酸酶(ALP)測(cè)定試劑盒檢測(cè)第l一5代MSCs成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)后的ALP活性，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較各代MSCs的成

3、骨分化能力。4術(shù)后大體觀察和影像學(xué)檢查：取第4代的同種異體MSCs進(jìn)行成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)，配成025106、05X106、1X106、2i06和4i06／m1五個(gè)接種密度組，并以培養(yǎng)液作為空白對(duì)照組，體外構(gòu)建組織工程骨，完全隨機(jī)化植入雙側(cè)橈骨中段節(jié)段性骨缺損動(dòng)物模型。術(shù)后進(jìn)行大體觀察，并在第2、4、8和12周拍前肢側(cè)位片，觀察各組的骨缺損修復(fù)情況并評(píng)分，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較不同接種密度構(gòu)建的組織工程骨骨缺損修復(fù)效果。5組織工程骨生物力學(xué)檢測(cè)

4、：術(shù)后第12周取出橈骨標(biāo)本，立即在生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)機(jī)上進(jìn)行三點(diǎn)彎曲，檢測(cè)最大載荷，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較不同接種密度構(gòu)建的組織工程骨體內(nèi)成骨后的生物力學(xué)性能。6組織工程骨組織形態(tài)學(xué)觀察：標(biāo)本行HE染色，觀察各組標(biāo)本支架材料的吸收和骨缺損的愈合情況，比較不同接種密度構(gòu)建的組織工程骨正位成骨效果。結(jié)果1MSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：密度離心法分離得到的MSCs形態(tài)較為一致，長(zhǎng)梭形樣，呈單層、漩渦樣生長(zhǎng)，未見(jiàn)復(fù)層生長(zhǎng)，第2代以后細(xì)胞形態(tài)更為一致，傳代至第5