XO、ACE、FXa抑制劑及抗氧化活性體外篩選模型的建立及KPC-108對阿霉素腎病大鼠的影響.pdf

1、目的：建立黃嘌呤氧化酶(XO)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)、凝血因子Xa(Fxa)抑制劑及抗氧化活性的體外篩選方法，對昆藥研究院積累樣品進(jìn)行體外篩選;根據(jù)對篩選結(jié)果的分析判斷，選擇具有潛在臨床開發(fā)前景的樣品進(jìn)行體內(nèi)腎病模型的初步藥效學(xué)及安全性考察，為深入開發(fā)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：采用對DPPH·、OH-、O2-、ABTS·清除能力測定，抑制鄰苯三酚自氧化活力測定、TOC測定等方法，考察受試樣品的抗氧化活性;采用分光光度

2、法測定酶反應(yīng)系統(tǒng)的動力學(xué)參數(shù)，考察受試樣品對ACE、XOD、F Xa活性的影響;采用大鼠阿霉素腎病模型，初步考察2種有潛在開發(fā)價(jià)值的化合物對模型動物尿蛋白、血液生化、血流動力學(xué)的影響;采用大鼠阿霉素腎病模型，從尿蛋白、血液生化及抗氧化活性、血流動力學(xué)、腎臟組織形態(tài)學(xué)方面再次考察篩選確定樣品的有效性，并采用最大耐受量試驗(yàn)初步考察其安全性。
　　 結(jié)果：⑴從26種候選樣品中篩選得到KPC-021，KPC-108、KPC-056、KP

3、C-002、KPC-070等化合物具有較強(qiáng)的抗氧化活性;樣品KPC-108、KPC-056具有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性;KPC-010、KPC-108對XOD活性有較強(qiáng)的抑制作用;結(jié)合化合物的結(jié)構(gòu)、活性及現(xiàn)有研究結(jié)果，選擇KPC-108、KPC-056兩樣品對以血管病變?yōu)橹鳌l(fā)病率不斷增加、臨床有必要的腎病模型大鼠進(jìn)行治療給藥觀察。⑵KPC-056、KPC-108兩樣品以20mg/kg劑量連續(xù)灌胃給藥4周，均能明顯降低模型動物血清Cr

4、e、NO水平，對蛋白尿升高有降低趨勢;能不同程度降低BUN、TG及全血粘度，對TP和ALB有回升趨勢;KPC-108還能明顯降低MDA的水平。與KPC-056相比，KPC-108降低血清Cre、TG、MDA及全血黏度的作用最為明顯，與模型組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。故選擇樣品KPC-108進(jìn)行第二輪體內(nèi)多劑量藥效學(xué)驗(yàn)證及初步安全性研究。⑶KPC-108以20、40mg/kg劑量連續(xù)灌胃給藥8周，能明顯減輕模型動物的蛋白尿，糾正低蛋白血癥、高脂

5、血癥及血液的高凝狀態(tài)，降低模型大鼠血清脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量，抑制腎臟組織中TNF-α的表達(dá)，對腎臟組織有保護(hù)作用，對腎功能有改善作用。KPC-108樣品小鼠灌胃給藥的最大耐受量≥18g/kg，未見動物發(fā)生明顯急性毒性反應(yīng)和死亡。
　　 結(jié)論：KPC-108對阿霉素腎炎模型大鼠的腎臟損傷有明顯保護(hù)作用，其機(jī)制可能為：①通過降低尿蛋白、血脂，減輕二者對腎臟的直接損害;②通過抗氧化作用減少由于腎小球上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)帶來的腎小球?yàn)V過