抗原肽-HLA-A2復(fù)合物誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)同種反應(yīng)性T細(xì)胞的應(yīng)答.pdf

1、T 細(xì)胞TCR識別的配體是抗原肽/MHC復(fù)合物(pMHC)，MHC型別不同的供/受者間進(jìn)行移植后會發(fā)生強(qiáng)烈的排斥反應(yīng)，其機(jī)制主要是同種反應(yīng)性T細(xì)胞(簡稱同種T細(xì)胞)識別同種異體組織抗原(簡稱同種抗原)并產(chǎn)生應(yīng)答。關(guān)于同種T細(xì)胞直接識別的可能模式，以及同種T細(xì)胞是否具有pMHC特異性，一直存在爭論。本論文擬從單個pMHC(即T細(xì)胞識別的抗原表位)角度分析，通過誘導(dǎo)單一pMHC特異性同種T細(xì)胞，證實(shí)同種T細(xì)胞的識別也具有pMHC特異性，并利

2、用同種T細(xì)胞識別的特異性探索打破耐受或誘導(dǎo)耐受的方法。論文共分為三部分，其主要內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　 一、同種T細(xì)胞對抗原的識別具有pMHC特異性
　　 為了研究同種T細(xì)胞是否存在對pMHC的特異性，本研究選擇Tyr/HLA-A2作為pMHC的代表，利用僅表達(dá)HLA-A2、TAP缺陷的T2細(xì)胞作為刺激細(xì)胞，提呈Tyr/HLA-A2，通過與HLA-A2陰性個體(HLA-A2-ve)的PBLs進(jìn)行長期混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(LTM

3、LC)，誘生Tyr/HLA-A2特異性的同種T細(xì)胞，用特異性細(xì)胞毒試驗(yàn)和pMHC四聚體染色檢測經(jīng)過LTMLC誘生的同種T細(xì)胞。結(jié)果顯示結(jié)合于同種HLA分子上的自身抗原肽與結(jié)合于自身HLA分子上的病毒肽一樣，可在體外有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的T細(xì)胞，顯示同種T細(xì)胞對抗原的識別亦具有pMHC特異性。
　　 二、pMHC二聚體加載到HLA-A2-ve單核細(xì)胞表面誘導(dǎo)單表位特異性的同種T細(xì)胞
　　 細(xì)胞表面存在種類繁多的pMHC，導(dǎo)

4、致傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)手段制備的同種T細(xì)胞為針對眾多pMHC的多克隆T細(xì)胞的集合，過繼該多克隆T細(xì)胞難以避免發(fā)生同種T細(xì)胞造成的移植物抗宿主反應(yīng)。本研究利用pMHC二聚體分子中的Fc段與單核細(xì)胞的FcR結(jié)合，將單一pMHC(Tyr/HLA-A2)加載到HLA-A2-ve個體單核細(xì)胞表面，誘導(dǎo)PBLs產(chǎn)生針對該表位的同種T細(xì)胞。結(jié)果顯示短期混合培養(yǎng)體系中，加載Tyr/HLA-A2的HLA-A2-ve單核細(xì)胞可刺激自體來源的PBLs明顯增殖，并誘導(dǎo)產(chǎn)生

5、針對該表位的同種T細(xì)胞，這種經(jīng)過短期體外擴(kuò)增的特異性同種反應(yīng)性T細(xì)胞具有更好的細(xì)胞活力與功能，有望過繼應(yīng)用打破病理性耐受。
　　 三、可溶性pMHC二聚體特異性抑制同種T細(xì)胞應(yīng)答
　　 在移植免疫研究中，誘導(dǎo)移植物特異性的外周耐受是尚未實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)。本研究通過建立HLA-A2-ve PBLs與T2/Tyr混合培養(yǎng)的同種反應(yīng)體系，研究可溶性抗原肽/HLA-A2二聚體對同種T細(xì)胞應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示，Tyr/HLA-A2二

6、聚體特異性抑制HLA-A2-ve PBLs被T2/Tyr刺激后的增殖效應(yīng)，并特異性抑制同種殺傷性T細(xì)胞的功能。Tyr/HLA-A2特異性T細(xì)胞頻率檢測結(jié)果提示，Tyr/HLA-A2二聚體可抑制Tyr/HLA-A2特異性同種T細(xì)胞的產(chǎn)生或誘導(dǎo)其無能，從而抑制同種反應(yīng)，為誘導(dǎo)移植受者對移植物特異性免疫耐受提供了新的手段。
　　
　　 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)和意義:
　　 1．本研究從單個表位角度證明了長期混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(

7、LTMLC)方法能夠誘生pMHC特異性的同種T細(xì)胞，同種反應(yīng)性T細(xì)胞與普通抗原反應(yīng)性T細(xì)胞一樣具有pMHC特異性。為同種T細(xì)胞直接識別機(jī)制提供了直接的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為后續(xù)研究提供了理論基礎(chǔ)。
　　 2．本研究利用HLA-A2二聚體，將單一pMHC加載到HLA-A2-ve個體的單核細(xì)胞表面，能夠有效誘導(dǎo)該個體來源的PBLs產(chǎn)生針對單一pMHC的同種T細(xì)胞，為制備單一pMHC特異性的同種T細(xì)胞、及其過繼治療提供了可能。