增殖細胞核抗原HLA-A2限制性CTL表位的預測及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:預測并鑒定人Ki-67和PCNA的HLA-A2限制性CTL表位，為后續(xù)腫瘤疫苗的制備提供理論基礎。
　　 方法:在Genebank查找Ki-67和PCNA的氨基酸序列，使用BIMAS和SYFPEITHI兩個數據庫對人Ki-67和PCNA的HLA-A2限制性CTL表位進行打分，將兩個數據庫評分的乘積作為總評分，根據總分高低預測Ki-67和PCNA的CTL表位。運用標準Fmoc方案合成候選肽和陽性對照肽(HIV-1 pol47

2、6-484)，并進行純化，鑒定其純度及分子量。采用經典T2-肽結合實驗初步篩選、驗證預測結果，以熒光系數（FI）作為候選肽與HLA-A2分子結合力大小的衡量指標：FI>1.5，親和力高，1.0　　 結果:通

3、過BIMAS法與SYFPEITHI法相結合的辦法，將Ki-67及PCNA基因HLA-A2限制性CTL表位的總評分從高到低排列，分別選定得分最高的7條和8條九肽作為候選肽。合成的候選肽及陽性對照肽（HIV-1 pol 476-484）經鑒定純度均達到95％以上，分子量測定值與理論值相符。經典T2-肽結合實驗結果顯示Ki-67候選肽中LQGETQLLV (280-288) 與HLA-A2分子具有中等親和力，F(xiàn)LTLWLTQV (444-45

4、2)及SLVMHTPPV (538-546) 具有低親和力。PCNA候選肽中KVLEALKDL (14-22)與HLA-A2分子具有中等親和力，KVSDYEMKL (110-118) 、SMSADVPLV (228-236) 和SILKKVLEA (10-18) 具有低親和力。表位肽免疫原性檢測結果顯示Ki-67候選肽中FMGTPVQKL（2282-2290）和 LQGETQLLV（280-288）形成的斑點數目（234.00±7.55

5、）、（235.33 ±21.22）與陽性對照組（251.00±18.68）無顯著差異，明顯高于陰性對照組（12.67±2.52）。PCNA候選肽中KVLEALKDL（14-22）、KVSDYEMKL（110-118）和SMDSSHVSL（39-47）形成的斑點數目（161.00±9.00）、（153.00±11.36）、（245.67±29.48）與陽性對照組無顯著差異，明顯高于陰性對照組。
　　 結論:Ki-67表位肽LQGE

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