低壓組合層析從草藥蛇足石杉中同時分離純化石杉堿甲和石杉堿乙的研究.pdf

1、本文以低壓層析提純植物天然產(chǎn)物為目的，通過選擇層析介質(zhì)實現(xiàn)低壓條件下的制備層析操作，再利用不同層析步驟間的優(yōu)化組合達到高純度、高回收率的分離提純效果。研究內(nèi)容涉及草藥蛇足石杉中兩個目標產(chǎn)物石杉堿甲和石杉堿乙的同時分離純化，通過浸提及三步低壓層析的過程優(yōu)化組合，實現(xiàn)了兩者的簡捷、高效提純。 論文首先選擇了專一性好的腈基HPLC柱(InertsilCN-3)，結合固相萃取，建立了適合的目標產(chǎn)物的快速、準確、重現(xiàn)性好的HPLC分析檢測

2、方法，作為在分離過程的跟蹤檢測目標產(chǎn)物的手段。 研究了蛇足石杉的浸提條件，發(fā)展了簡單有效的浸提方法，即用1％硫酸室溫浸泡兩次，每次一天，固液比分別是1：10和1：5(w/v)。浸出液中石杉堿甲和石杉堿乙的平均回收率分別為95.2％和96.8％。 研究了大孔吸附樹脂層析取代多步的液液萃取操作進行浸出液的富集濃縮過程，篩選了一系列樹脂，確定了CBJ-23作為初分離的介質(zhì)。優(yōu)化了CBJ-23大孔吸附樹脂層析的條件，使石杉堿甲和

3、石杉堿乙的含量分別從0.188％和0.079％提高到了1.72％和0.734％，純化倍數(shù)均＞9；最后產(chǎn)物的回收率分別達到了92.3％和93.1％。 從大孔吸附樹脂層析初分離得到的粗品出發(fā)，參照文獻研究了硅膠正相層析的分離純化效果，表明由于分辨率低，且存在產(chǎn)物的不可逆吸附，石杉堿甲的回收率和純度都很低，而石杉堿乙得不到有效回收。 探索了反相層析分離純化粗品中石杉堿甲和石杉堿乙的工藝。首先以通用型的C18鍵合硅膠介質(zhì)YWGC

4、18探索了反相層析對粗品分離純化效果，結果表明石杉堿甲和石杉堿乙在C18硅膠上可以得到部分分離，但分離度較低，因此產(chǎn)物的純度和回收率均不理想；用新型的PST介質(zhì)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的C18鍵合硅膠介質(zhì)反相層析能提高分離度和避免產(chǎn)物的不可逆吸附，同時大大提高分離速度，但仍未實現(xiàn)基線分離；而腈基介質(zhì)BondesilCN具有對石杉堿甲和石杉堿乙的特殊選擇性，因此可以將它們完全分離。 對分離效果較好但載量較低PST和腈基柱反相層析進行了有效的組合，

5、即用PST反相層析去除粗品中的絕大部分雜質(zhì)，用腈基柱層析將石杉堿甲和石杉堿乙完全分離，從而使分離載量大大增加。經(jīng)組合層析，獲得的兩種產(chǎn)物純度均為99％以上，回收率達到了97％左右，同時可以省略結晶步驟，避免產(chǎn)物在結晶過程時產(chǎn)生的大約95％的損失。 蛇足石杉經(jīng)上述稀硫酸浸提、大孔吸附樹脂層析、組合的PST反相層析和腈基柱層析四步，石杉堿甲和石杉堿乙的含量可以分別從0.0231％和0.0096％提高到大于99％，總的回收率分別為85