小鼠CLP膿毒癥模型的建立及抗菌肽Lycosin-1對(duì)其肝腎功能的影響.pdf

1、目的：
　　膿毒癥(sepsis)是由細(xì)菌、真菌、病毒等各種感染因素導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征，病情加重可發(fā)展為多器官功能衰竭及膿毒癥休克。炎癥反應(yīng)過(guò)度激活及免疫調(diào)節(jié)紊亂在膿毒癥發(fā)生發(fā)展中起重要作用。盲腸結(jié)扎穿孔(Cecal ligation and puncture，CLP)法可引起腹腔混合細(xì)菌感染，誘發(fā)急性腹膜炎導(dǎo)致膿毒癥。利用CLP法制作的膿毒癥模型被廣泛用于膿毒癥病理生理機(jī)制及藥物治療等研究?？咕腖ycosin-1(Lyc

2、)是從狼蛛singorensis中提取的陽(yáng)離子抗菌肽，具有廣譜抗菌作用。近年來(lái)，許多研究發(fā)現(xiàn)抗菌肽對(duì)CLP膿毒癥模型有抗菌作用，但抗菌肽在抗菌的同時(shí)是否對(duì)機(jī)體的肝腎功能產(chǎn)生不良影響，目前相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究探討抗菌肽Lycosin-1對(duì)正常Balb/c小鼠及膿毒癥模型小鼠的肝腎功能影響。
　　方法：
　　本研究分三部分:首先采用盲腸結(jié)扎穿孔(Cecal ligation andpuncture，CLP

3、)法制作小鼠膿毒癥模型，改變盲腸結(jié)扎長(zhǎng)度、穿刺針大小及穿孔次數(shù)，以獲得中重度膿毒癥動(dòng)物模型，即72h小鼠死亡率達(dá)70-100％。第二部分為腹腔注射不同濃度Lyc對(duì)正常小鼠肝腎急性毒性(6h、12h、24h)的研究，分為5個(gè)濃度亞組，即25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、500ug/ml組，各組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只。觀察24h內(nèi)各組小鼠死亡情況及一般活動(dòng)狀況，并在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取血，檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草

4、轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮（BUN）、血肌酐(SCr)等生化指標(biāo)的變化。第三部分為探討腹腔注射Lyc(200ug/ml)對(duì)CLP膿毒癥模型小鼠的肝臟和腎臟是否有保護(hù)作用，分為L(zhǎng)yc干預(yù)6h組、12h組、24h組，各組再分為4個(gè)小組:①Sham組（假手術(shù)組）:打開(kāi)小鼠腹腔找到盲腸，不結(jié)扎及穿孔，關(guān)閉腹腔后腹腔注射0.5ml生理鹽水;②Sham+Lyc:不結(jié)扎及穿孔盲腸，關(guān)閉腹腔時(shí)注射Lyc(200ug/ml)0.5ml:③CLP組:見(jiàn)實(shí)驗(yàn)一

5、中C組CLP模型制備方法，即在距盲腸末端1cm處結(jié)扎，并用12號(hào)針頭貫穿盲腸穿孔2次。腹腔注射0.5ml生理鹽水液體復(fù)蘇;④CLP+Lyc見(jiàn)實(shí)驗(yàn)一中的C組CLP模型制備方法，術(shù)后立即腹腔注射Lyc(200ug/ml)0.5ml，每小組各10只小鼠。同樣檢測(cè)各組小鼠血清肝腎代謝指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.采用距盲腸末端1cm處結(jié)扎，12號(hào)針頭貫穿盲腸穿孔2次的方法制備的CLP模型小鼠72h死亡率達(dá)70-100％，且具有典

6、型膿毒癥表現(xiàn)，死亡小鼠解剖證實(shí)腹腔存在惡臭積液、部分腸管粘連。
　　2.不同濃度Lycosin-1腹腔注射24h內(nèi)均無(wú)小鼠死亡，與對(duì)照組比較，雖然給藥組的一些指標(biāo)稍偏高或偏低，但差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，且無(wú)劑量依賴(lài)性;
　　3.與假手術(shù)組比較，CLP膿毒癥小鼠血清ALT、AST、BUN、SCr4個(gè)指標(biāo)在術(shù)后6h、12h、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); Lyc干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)血清ALT、AST、