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1、QM基因是一種與腫瘤抑制,細(xì)胞生長(zhǎng),分化,發(fā)育和凋亡等有關(guān)的重要基因。QM同源基因廣泛地存在于動(dòng)物、植物以及真菌,目前已在小鼠、雞、果蠅、牛、酵母、玉米和水稻等生物中克隆了QM同源基因,這些基因的核苷酸及其編碼的氨基酸序列高度保守。迄今為止,綿羊中尚未見QM基因的相關(guān)報(bào)道。本研究首次從涼山半細(xì)毛羊基因組中克隆出QM基因,并構(gòu)建出QM基因分子進(jìn)化關(guān)系,為QM的分子進(jìn)化以及生物學(xué)功能的深入研究打下基礎(chǔ)。 本研究應(yīng)用電子克隆的方法,克
2、隆出綿羊QM基因,并構(gòu)建15個(gè)物種間QM基因分子進(jìn)化關(guān)系。同時(shí)利用QM基因的保守區(qū)域,設(shè)計(jì)了特異性引物,克隆出涼山半細(xì)毛羊QM同源基因,命名為SQM(GeneBank登陸號(hào):EU143791),并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。SQM基因全長(zhǎng)771 bp,含有一個(gè)最長(zhǎng)為645 bp的完整的開放閱讀框,5’UTR長(zhǎng)度為70 bp,第71位到716位為ORF,長(zhǎng)645 bp,編碼214個(gè)氨基酸,3’UTR長(zhǎng)度為55 bp,在754 bp——759
3、 bp區(qū)域內(nèi)有一個(gè)AATAAA加尾信號(hào)。SQM基因編碼的多肽,預(yù)測(cè)其分子量大小為24.61 kDa,等電點(diǎn)pI為10.6,其中Asp和Glu酸性氨基酸殘基數(shù)為7.9%,堿性氨基酸Arg和Lys殘基數(shù)為20.92%,表明綿羊QM基因蛋白為堿性蛋白質(zhì)。預(yù)測(cè)SQM蛋8——級(jí)結(jié)構(gòu)有6個(gè)α螺旋區(qū),富含10個(gè)β折疊片,其余部分為無規(guī)卷曲。綿羊QM基因和牛QM基因在進(jìn)化上的距離最短,同時(shí)也發(fā)現(xiàn)QM基因具有極大的保守性。 采用數(shù)字化差異顯示分析
4、,對(duì)綿羊EST數(shù)據(jù)庫中主要組織細(xì)胞如腦、淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞、腎、脾臟、肝臟、腸和肌肉中QM的表達(dá)進(jìn)行了研究,探討了SQM基因在不同器官之間、正常組織與病變組織之間的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)QM基因在脾臟和淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)量大于其他組織,在病變組織中的表達(dá)強(qiáng)于在正常組織中的表達(dá)。同時(shí),QM基因在綿羊骨組織分化細(xì)胞中也有較強(qiáng)表達(dá),推斷QM基因與綿羊的免疫調(diào)控,細(xì)胞分化有密切的關(guān)系。 采用RT-PCR方法,選取涼山半細(xì)毛羊肝臟,腎臟,心臟
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