涼山半細(xì)毛羊QM基因的克隆、組織表達(dá)及生物信息學(xué)分析.pdf

1、QM基因是一種與腫瘤抑制，細(xì)胞生長(zhǎng)，分化，發(fā)育和凋亡等有關(guān)的重要基因。QM同源基因廣泛地存在于動(dòng)物、植物以及真菌，目前已在小鼠、雞、果蠅、牛、酵母、玉米和水稻等生物中克隆了QM同源基因，這些基因的核苷酸及其編碼的氨基酸序列高度保守。迄今為止，綿羊中尚未見QM基因的相關(guān)報(bào)道。本研究首次從涼山半細(xì)毛羊基因組中克隆出QM基因，并構(gòu)建出QM基因分子進(jìn)化關(guān)系，為QM的分子進(jìn)化以及生物學(xué)功能的深入研究打下基礎(chǔ)。 本研究應(yīng)用電子克隆的方法，克

2、隆出綿羊QM基因，并構(gòu)建15個(gè)物種間QM基因分子進(jìn)化關(guān)系。同時(shí)利用QM基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)了特異性引物，克隆出涼山半細(xì)毛羊QM同源基因，命名為SQM（GeneBank登陸號(hào)：EU143791），并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。SQM基因全長(zhǎng)771 bp，含有一個(gè)最長(zhǎng)為645 bp的完整的開放閱讀框，5’UTR長(zhǎng)度為70 bp，第71位到716位為ORF，長(zhǎng)645 bp，編碼214個(gè)氨基酸，3’UTR長(zhǎng)度為55 bp，在754 bp——759

3、 bp區(qū)域內(nèi)有一個(gè)AATAAA加尾信號(hào)。SQM基因編碼的多肽，預(yù)測(cè)其分子量大小為24．61 kDa，等電點(diǎn)pI為10．6，其中Asp和Glu酸性氨基酸殘基數(shù)為7．9％，堿性氨基酸Arg和Lys殘基數(shù)為20．92％，表明綿羊QM基因蛋白為堿性蛋白質(zhì)。預(yù)測(cè)SQM蛋8——級(jí)結(jié)構(gòu)有6個(gè)α螺旋區(qū)，富含10個(gè)β折疊片，其余部分為無規(guī)卷曲。綿羊QM基因和牛QM基因在進(jìn)化上的距離最短，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)QM基因具有極大的保守性。 采用數(shù)字化差異顯示分析

4、，對(duì)綿羊EST數(shù)據(jù)庫中主要組織細(xì)胞如腦、淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞、腎、脾臟、肝臟、腸和肌肉中QM的表達(dá)進(jìn)行了研究，探討了SQM基因在不同器官之間、正常組織與病變組織之間的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)QM基因在脾臟和淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)量大于其他組織，在病變組織中的表達(dá)強(qiáng)于在正常組織中的表達(dá)。同時(shí)，QM基因在綿羊骨組織分化細(xì)胞中也有較強(qiáng)表達(dá)，推斷QM基因與綿羊的免疫調(diào)控，細(xì)胞分化有密切的關(guān)系。 采用RT-PCR方法，選取涼山半細(xì)毛羊肝臟，腎臟，心臟