弓形蟲新基因TgIMP1的生物信息學(xué)分析、克隆及表達.pdf

1、剛地弓形蟲是一種專性細胞內(nèi)寄生原蟲，可感染種類繁多的哺乳動物和人類。一般情況下，成年人感染弓形蟲不會有太明顯癥狀;而對于先天免疫系統(tǒng)有缺陷、或者進行器官移植手術(shù)的患者，感染弓形蟲便可能會引起多種并發(fā)疾病，而且有可能致人死亡。弓形蟲感染孕婦后，孕婦可將病原體可傳染給胎兒，導(dǎo)致胎兒智力發(fā)育不全，甚至導(dǎo)致胎兒畸形、胎兒死亡等。家畜被弓形蟲感染后，也會引發(fā)多種病癥甚至死亡，造成經(jīng)濟上的嚴重損失。
　　 核酸疫苗作為一種新興的疫苗，具有操

2、作簡便、免疫目的性較強、相對較為安全而被高度重視。近年來，針對弓形蟲病的DNA疫苗的研究取得大量的進展，然而，幾乎沒有一種疫苗可以徹底地預(yù)防和控制寄生蟲病。
　　 本研究分析鑒定了一種新型的弓形蟲蛋白，名為‘immunemappedprotein1’(TgIMP1)。該類蛋白首先由Blake，D.P.等在愛美耳球蟲屬發(fā)現(xiàn)，并對抗愛美耳球蟲感染有一定的保護性，其同源體蛋白也存在于剛地弓形蟲和新孢子蟲體內(nèi)。Blake，D.P等認為這

3、些寄生蟲的保護性抗原具有一些共有的特性，因此，我們有理由推斷，弓形蟲體內(nèi)的IMP1蛋白(TgIMP1)也具有抗弓形蟲感染的能力。
　　 我們運用多種生物信息學(xué)方法預(yù)測了該蛋白的物化特性、信號肽位點、跨膜結(jié)構(gòu)域、抗原性、高級結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TgIMP1基因ORF全長1，697bp，編碼一個含400個氨基酸的蛋白質(zhì)，該蛋白含有多個翻譯后修飾位點、親水性區(qū)域、跨膜序列及淋巴B細胞抗原表位，這從理論上確定了TgIMP1具有潛

4、在的免疫原性，是一種潛在的抗弓形蟲病候選基因。然后，我們通過PCR方法擴增出目的基因，將其與克隆載體相連，形成重組質(zhì)粒，并用PCR、雙酶切、測序等方法對重組質(zhì)粒進行鑒定。而后，我們將TgIMP1基因插入真核表達載體pBudCE4.1，形成重組真核表達質(zhì)粒pBudCE4.1-TgIMP1，經(jīng)雙酶切、PCR等方法鑒定后，pBudCE4.1-TgIMP1被轉(zhuǎn)入人體成纖維細胞HFF中進行表達。我們通過RT-PCR等技術(shù)對其表達情況進行鑒定。實驗