萘酰亞胺—多胺綴合物2A體外抗腫瘤作用機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　多胺是一類廣泛存在于組織細(xì)胞內(nèi)的天然的胺類物質(zhì),腫瘤的快速生長有賴于細(xì)胞內(nèi)的多胺含量的大幅增長,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他正常組織細(xì)胞,而天然多胺可以作為一種載體通過多胺轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。研究證明,在共價多胺鏈上綴合上一個細(xì)胞毒類藥物,也能被轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi),而發(fā)揮高選擇性的抗腫瘤作用。萘酰亞胺類化合物對DNA有良好的嵌入性能,腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的DNA存在差異性,可以起到一個靶向作用。本文對新型的萘酰亞胺-多胺綴合物2A的抗腫瘤

2、活性進(jìn)行了研究,并探討其作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　以人肝癌細(xì)胞HepG2為研究對象,先通過基因轉(zhuǎn)染把Akt1基因轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞內(nèi),通過細(xì)胞生長能力檢測,克隆形成檢測,細(xì)胞運(yùn)動能力檢測來研究Akt1基因?qū)?xì)胞的作用。通過MTT法來檢測2A的抗腫瘤活性,通過AO/EB/Hoechst33342,PI/Hoechst33342,RH123/Hoechst33342,Lyso-Tracker Red/Hoechst3334

3、2,熒光染色法檢測2A對細(xì)胞的凋亡的影響;通過transwell小室實(shí)驗(yàn),研究2A對細(xì)胞遷移和侵襲的影響;通過免疫印跡法來檢測Caspases家族,Bcl-2家族,細(xì)胞色素c,MMPs家族等相關(guān)的蛋白的表達(dá),并對其相互關(guān)系進(jìn)行了分析。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　轉(zhuǎn)染Akt1的HepG2細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞相比,細(xì)胞生長,增殖,運(yùn)動能力都有所提高。通過2A對兩種細(xì)胞處理,發(fā)現(xiàn)都有生長抑制作用,對HepG2細(xì)胞的IC50值是(

4、12.03±0.21)μM,對HepG2-Akt1細(xì)胞的IC50值是(19.68±1.54)μM。轉(zhuǎn)染的HepG2肝癌細(xì)胞對于藥物有更好的耐受,并且凋亡呈時間劑量依賴性。通過transwell小室的遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2A可以抑制肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲,并呈現(xiàn)時間劑量依賴性。通過染色觀察2A會誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明2A引起Caspases家族的活化,細(xì)胞色素c的表達(dá)增多,Bcl-2家族參與了凋亡的過程,VEGF蛋白的下調(diào)