下調(diào)pp32恢復(fù)p300-CBP組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶活性改善學(xué)習(xí)記憶障礙.pdf

1、【背景】
　　認(rèn)知功能下降是包括阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)在內(nèi)的神經(jīng)退行性疾病的一個(gè)重要特征。目前我們對(duì)引起認(rèn)知損傷原因知道的還很有限,同時(shí)也缺乏有效的治療方法。長(zhǎng)期記憶的形成需要有穩(wěn)定的基因表達(dá),這其中一部分主要受染色質(zhì)的表觀遺傳學(xué)的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)中與學(xué)習(xí)和記憶相關(guān)的蛋白質(zhì),其基因水平的調(diào)控主要跟組蛋白乙?；揎椨嘘P(guān)。組蛋白的乙酰化修飾后能降低與DNA靜電吸引,促使轉(zhuǎn)錄因子與基因啟動(dòng)子的

2、結(jié)合,最終引起記憶相關(guān)基因的表達(dá)。另外,通過(guò)抑制組蛋白去乙?；?HDAC),提高組蛋白乙?；蕉委熣J(rèn)知損傷的藥物也取得了令人鼓舞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。但是,引起組蛋白乙酰化異常而導(dǎo)致記憶損傷的致病因子并不清楚。
　　組蛋白乙酰化修飾主要由組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)及HDAC調(diào)節(jié),而目前發(fā)現(xiàn)的與學(xué)習(xí)記憶功能的HAT為:p300/CBPHAT。已經(jīng)證實(shí)p300/CBPHAT在海馬依賴性的空間記憶形成中起著關(guān)鍵性角色,并且HAT活性降低參

3、與到神經(jīng)退行性疾病中。因此,找出能夠特異恢復(fù)p300/CBPHAT活性的因子可能是治療學(xué)習(xí)記憶障礙相關(guān)疾病的最佳靶點(diǎn)。pp32,細(xì)胞內(nèi)抑制p300/CBPHAT復(fù)合物(INHAT)的一個(gè)主要因子。pp32為INHAT發(fā)揮去抑制p300/CBPHAT必須因子,在AD患者腦中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)增高。
　　【目的】
　　本研究旨在利用htau轉(zhuǎn)基因鼠和學(xué)習(xí)與記憶障礙的老齡鼠,探討下調(diào)pp32對(duì)p300/CBPHAT活性的影響和對(duì)學(xué)習(xí)記憶能

4、力作用。
　　【方法】
　　構(gòu)建特異針對(duì)pp32基因序列的RNA干擾慢病毒載體Lenti-NC、Lenti-Sipp32。利用水迷宮方法篩選出學(xué)習(xí)記憶障礙的aged小鼠。采用腦立體定位技術(shù),分別在學(xué)習(xí)記憶障礙的老齡小鼠,htau轉(zhuǎn)基因小鼠的海馬注射2μl的Lenti-NC或Lenti-sipp32。30天后,利用水迷宮及電跳臺(tái)檢測(cè)其學(xué)習(xí)記憶能力變化。利用免疫組化、免疫印跡和免疫熒光檢測(cè)相關(guān)蛋白的變化;采用高爾基染色技術(shù)統(tǒng)計(jì)分

5、析海CA3區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突的形態(tài)及樹(shù)突棘的密度;使用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)pp32及相關(guān)記憶蛋白的mRNA含量。
　　【結(jié)果】
　　Lenti-sipp32可以有效降低pp32的mRNA和蛋白水平,提高HAT和CREB活性,逆轉(zhuǎn)海馬中突觸相關(guān)蛋白及其mRNA水平,增加海馬CA3區(qū)錐體神經(jīng)元樹(shù)突復(fù)雜性和樹(shù)突棘密度,恢復(fù)記憶障礙的老齡鼠和htau轉(zhuǎn)基因鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。下調(diào)pp32還可以提高磷酸酯酶PP2A的活性,降低htau轉(zhuǎn)基