山東省貝類弧菌病流行病學(xué)調(diào)查及副溶血弧菌快速檢測(cè)方法的建立.pdf

1、山東省貝類資源豐富，養(yǎng)殖面積廣闊，約占海水養(yǎng)殖面積的66％，年產(chǎn)量約占全省海水養(yǎng)殖總產(chǎn)量的80%，居各類水產(chǎn)品首位。近幾年來(lái)，伴隨著沿海經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展，環(huán)境污染問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，生態(tài)養(yǎng)殖系統(tǒng)遭到了嚴(yán)重破壞，微生物病害也日趨泛濫，某些地區(qū)養(yǎng)殖貝類出現(xiàn)了嚴(yán)重的死亡現(xiàn)象，生態(tài)養(yǎng)殖生產(chǎn)受到了嚴(yán)重的阻礙。每年夏季的7-8月份是養(yǎng)殖貝類微生物病害流行爆發(fā)的季節(jié)，其中弧菌(Vibrio)是養(yǎng)殖貝類中的主要病原菌之一。因此，了解山東省主要經(jīng)濟(jì)貝類中弧菌的

2、流行情況，并建立簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)方法顯得尤為重要。
　　通過(guò)對(duì)山東沿海各養(yǎng)殖海區(qū)及相鄰地區(qū)的主要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類養(yǎng)殖地區(qū)進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)了大量貝類死亡的現(xiàn)象。本試驗(yàn)采集了濰坊的羊口，東營(yíng)的墾利、刁口、廣利，煙臺(tái)的招遠(yuǎn)、萊州以及日照、青島、威海等地方的主要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類及野生貝類。通過(guò)細(xì)菌分離、生化鑒定、16SrDNA的克隆以及序列分析。結(jié)果：共采集各地樣品的68份，其中主要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類44份、野生貝類24份；從樣品中共分離細(xì)菌151株，可分

3、為溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、創(chuàng)傷弧菌(Vibrio vulnificus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)等，弧菌分離率高達(dá)96%；弧菌中哈氏弧菌的分離率最高為24%，其次是溶藻弧菌為21%；哈氏弧菌和副溶血性弧菌采樣分離主要在東營(yíng)、

4、煙臺(tái)等地，溶藻弧菌主要在青島、威海等地；另外，哈氏弧菌主要分離自扇貝、花蛤、毛蚶等品種，副溶血弧菌主要分離自花蛤、毛蚶中，溶藻弧菌主要分離自魁蚶、牡蠣中，其中哈氏弧菌在各貝類中較為普遍。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明：哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌是山東省經(jīng)濟(jì)貝類弧菌病的主要病原菌之一，對(duì)扇貝(Scallop)、牡蠣(Ostrea gigas thunberg)、毛蚶(Scapharca subcrenata)、魁蚶(Scapharca b

5、roughtonii)、花蛤(Ruditapes philippinarum)危害嚴(yán)重；弧菌病主要發(fā)生在7-8月份的高溫季節(jié)，這與細(xì)菌的最適生長(zhǎng)溫度一致。
　　食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了食品中副溶血性弧菌的檢測(cè)方法，可見國(guó)家對(duì)其重視。試驗(yàn)主要目的是建立一種貝類副溶血性弧菌的快速檢測(cè)方法，不僅保證了食品安全，也便于貝類副溶血性弧菌病的檢測(cè)。試驗(yàn)對(duì)副溶血性弧菌的不耐熱溶血毒素基因 tlh設(shè)計(jì)了三對(duì)特異性引物（內(nèi)引物、外引物、環(huán)引物），根