小麥耐鹽相關(guān)基因的克隆與分析.pdf

1、河北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文小麥耐鹽相關(guān)基因的克隆與分析姓名：黃勝和申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：黃占景沈銀柱20050501河北帥范大學(xué)碩十研究生學(xué)位論文摘要植物耐鹽性研究不僅對作物遺傳改良有重要意義，而且還是植物基礎(chǔ)生物學(xué)研究的一個重要組成部分。因此，植物耐鹽相關(guān)基岡的克隆受到人們廣泛的關(guān)注。近年來，隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)并克隆了一些植物耐鹽相關(guān)基因，但離人們的期望值還相籌很遠(yuǎn)。本研究在本室用cDNA—AFLP

2、得到G09～94號差異eDNA序列的基礎(chǔ)上，通過EST比對進(jìn)行電子克隆，得到一含完整ORF區(qū)的eDNA序列，再以此cDNA序列進(jìn)行Blastn，發(fā)現(xiàn)與水稻一未知功能的基因同源性達(dá)90％。設(shè)計引物，進(jìn)行PCR，測序結(jié)果與電子克隆結(jié)果完全一致，證明克隆成功。Northern雜交顯示，0％Natl處理的H8706—34和RH8706—49幼苗、l％Nacl處理的H8706—34和RH8706—49幼曲都表達(dá)此基因，但1％NaCl處理的RH87

3、06—49表達(dá)量明顯增高因此，將此基岡命名為7aSC(Triticumasetivu$LSa]ttolerantCorrelative)，井作為一新基因被GemBank接受(AY956330)。表達(dá)譜基因芯片數(shù)據(jù)庫顯示，用l％NaCl處理RH8706—49小麥幼苗，此基因在葉片中為短時間表達(dá)F調(diào)，比時間表達(dá)上調(diào)。半定最RT—PCR結(jié)果證實，用1％NaC]處理，H870634根部TaSC基因表達(dá)量先F降，然后緩慢上升到正常量，而RH870

4、6—49中短時間表達(dá)下調(diào)，長時間表達(dá)上凋。比對EST庫結(jié)果表明，7aSC基因在根、N卜種_F、幼穗、子房等組織器官中都有表達(dá)，而比對MappedwheatESTs庫結(jié)果可以將TaSC基因定位于染色體5BL、5DL、7DS上。將DNA序列翻譯成蛋白，用多個生物軟件或?qū)I(yè)網(wǎng)站預(yù)測其性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、定位和功能，結(jié)果顯示，此蛋白pI值為396，分子量為1531576Da，有4個跨膜區(qū)和1個信號肽區(qū)，定位在質(zhì)膜上，與一未知功能的假定膜蛋白同源性為82

5、2％，與另一未知功能的蛋自家族(UFP220)同源性達(dá)798％，并且具有豆蔻?；?、酪氨酸硫酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和蛋白激酶C磷酸化等功能位點。因此推測玩孵基因是組成型表達(dá)，而且沒有組織器官特異性，同時，可能是植物逆境脅迫反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)中的一個中下游基因，其表達(dá)產(chǎn)物參與了多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，將上游反應(yīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)到下游反應(yīng)元件。以克隆載體為基礎(chǔ)，構(gòu)建了雙元表達(dá)載體p1300一TS和p1300一TS—GP，并與對照質(zhì)粒p1300、p1300一GP一