庫普弗細(xì)胞的缺血、缺氧和炎癥反應(yīng)相關(guān)基因與大鼠肝再生的相關(guān)性研究.pdf

1、大鼠部分肝切除(partial hepatectomy，PH)造成的損傷、感染等可引發(fā)炎癥反應(yīng)，并可誘導(dǎo)缺血、缺氧等反應(yīng)。而庫普弗細(xì)胞作為肝臟內(nèi)的巨噬細(xì)胞，在此時(shí)會分泌炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子，通過其參與的信號通路來參與肝再生進(jìn)行。為深入了解庫普弗細(xì)胞上述反應(yīng)相關(guān)基因與大鼠肝再生的相關(guān)性，本文用percoll密度梯度離心和免疫磁珠方法分離大鼠再生肝庫普弗細(xì)胞，用Rat Genome2302.0芯片等方法檢測其缺血、缺氧、炎癥反應(yīng)相關(guān)基因在大鼠

2、肝再生中表達(dá)變化，用生物學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)等方法分析上述基因與大鼠肝再生的相關(guān)性。同時(shí)，用LYZ和ED2的抗體鑒定庫普弗細(xì)胞。結(jié)果表明，分離的細(xì)胞純度達(dá)96％以上；用RT-PCR和Rat Genome2302.0芯片檢測庫普弗細(xì)胞的持家基因b2m、gapdh以及功能基因cd86、icaml、pcna、trim24的表達(dá)情況，表明，b2m、gapdh未發(fā)生有意義表達(dá)變化，4個功能基因的表達(dá)變化與芯片結(jié)果相似，表明芯片檢測結(jié)果可靠；用Weste

3、rn印跡方法檢測各時(shí)點(diǎn)庫普弗細(xì)胞的標(biāo)志蛋白溶菌酶和β-肌動蛋白表明，三者的含量均與對照時(shí)點(diǎn)相近，再生肝分離的庫普弗細(xì)胞純度均較高。 本文通過檢索NCBI、KEGG、RGD等網(wǎng)站資料和查閱相關(guān)文獻(xiàn)得知，再生肝庫普弗細(xì)胞的40、17、108個基因與缺血、缺氧、炎癥反應(yīng)相關(guān)。其中，起始表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的缺血、缺氧反應(yīng)相關(guān)基因數(shù)分別為29和11，11和6；基因總表達(dá)上調(diào)和下調(diào)次數(shù)分別為123和38，29和11。它們表達(dá)的時(shí)間相關(guān)性分為2h

4、、6與36h、12h、24與30h、72h、120與168h等6組，表達(dá)模式分為11類。炎癥反應(yīng)中，基因以表達(dá)下調(diào)為主，其中，組織受損及感染、血管反應(yīng)、細(xì)胞因子釋放、細(xì)胞活化、增殖及分化、噬菌作用的相關(guān)基因的起始表達(dá)上調(diào)和下調(diào)基因數(shù)分別為1和3，10和7，26和34，24和28，1和5，基因總表達(dá)上調(diào)和下調(diào)次數(shù)分別為2和11，41和40，144和155，103和94，5和18，它們表達(dá)的時(shí)間相關(guān)性分為5、6、7、6、6組?？傮w來看，部分