大鼠肝再生期間14-3-3基因與糖代謝相關(guān)酶基因的表達(dá).pdf

1、肝再生的研究由來已久，研究肝再生的機(jī)理能夠?yàn)榕R床上肝病的治療提供理論依據(jù)，研究肝再生常用的模型是2/3部分肝切除模型。14-3-3是一種高度保守的蛋白質(zhì)，各亞型具有多種功能，但是這些亞型在大鼠肝再生中的研究還未見報(bào)道。肝再生期間糖代謝的變化是肝再生研究中的一項(xiàng)重要內(nèi)容，這些變化可以通過糖代謝某些關(guān)鍵步驟中酶的變化來反映。在增殖的細(xì)胞中，14-3-3很可能會(huì)通過調(diào)節(jié)糖代謝中一些信號(hào)分子而影響這些酶的活性，進(jìn)而影響肝再生中糖代謝的進(jìn)程。

2、r>　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖牵ㄟ^研究14-3-3和糖代謝相關(guān)酶對(duì)大鼠肝再生過程的影響為進(jìn)一步探討肝再生的機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　針對(duì)上述目的制定實(shí)驗(yàn)方法。
　　(1)飼喂SD純系大鼠，然后對(duì)大鼠實(shí)施2/3部分肝切除手術(shù);在部分肝切除手術(shù)后的0h、2h、6h、12h、24h、36h、72h、120h和168h取出大鼠剩余肝臟，并制備待檢樣品。
　　(2)利用大鼠基因組2302.0芯片和聚丙烯酰氨凝膠電泳的方法檢測(cè)大鼠肝再生期間1

3、4-3-3的7種亞型的基因表達(dá)情況，用Cy3/Cy5的方法分析數(shù)據(jù)，1433的7種亞型是14-3-3β/α、14-3-3γ、14-3-3ε、14-3-3η、14-3-3σ、14-3-3ζ/δ和14-3-3τ/θ。
　　(3)利用RT-PCR的方法檢測(cè)大鼠肝再生期間糖代謝相關(guān)酶的基因表達(dá)情況，用2-△△ct未配對(duì)T檢驗(yàn)法分析數(shù)據(jù)，糖代謝相關(guān)酶是丙酮酸激酶LR、丙酮酸脫氫酶A、檸檬酸合成酶、乳酸脫氫酶A、乳酸脫氫酶B和葡萄糖6磷酸脫氫

4、酶。
　　最終得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　(1)在大鼠部分肝切除手術(shù)后的168h內(nèi)，14-3-3的7種亞型中有4種發(fā)生了表達(dá)，分別是14-3-3γ、14-3-3ε、14-3-3σ和14-3-3τ/θ。與0h相比，14-3-3ε在2h的表達(dá)明顯下調(diào)(t＜t0.05(4)=2.776，p＞0.05)，在24h、30h、72h、120h和168h的表達(dá)明顯上調(diào)(t=3.871，2.970，2.895，2.970和3.899＞t0.05

5、(4)=2.776，p＜0.05)，14-3-3σ在30h的表達(dá)明顯上調(diào)(t=5.750＞t0.01(4)=4.601，p＜0.01)，14-3-3τ/θ在2h、24h、30h和36h的表達(dá)明顯上調(diào)(t=3.948，3.660，3.952和2.860＞t0.05(4)=2.776，p＜0.05)。與0h作對(duì)比，其余檢測(cè)點(diǎn)基因的表達(dá)均無明顯差別(t＜t0.05(4)=2.776，p＞0.05)。
　　(2)與0h相比，丙酮酸激酶LR

6、的基因在2h的表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，在12h、24h、30h、36h和120h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)，在6h、72h和168h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)，丙酮酸脫氫酶A的基因在6h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)，在12h、30h、36h、72h、120h、和168h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)，檸檬酸合成酶的基因在6h、12h、24h、30h、36h、72h、120h、和168h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)，乳酸

7、脫氫酶A的基因在2h、6h、12h、24h、30h、36h、72h和120h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)，乳酸脫氫酶B的基因在2h處的表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，葡萄糖6磷酸脫氫酶的基因在2h的表達(dá)明顯下調(diào)，(P＜0.05)，在6h、12h、24h、30h、36h、72h和168h的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)，其余檢測(cè)點(diǎn)基因的表達(dá)均無明顯差別(P＞0.05)。
　　綜上所述得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。
　　(1)在大鼠肝再生過程中，