非創(chuàng)傷性肢體缺血預(yù)處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的延遲保護(hù)作用及機(jī)制的實驗研究.pdf

1、目的:研究非創(chuàng)傷性肢體缺血預(yù)處理(NIPC)對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的延遲保護(hù)作用，并探討線粒體ATP敏感性鉀通道(mitoKAT<,p>通道)在這種保護(hù)機(jī)制中的作用。 方法:將32只雄性SD大鼠隨機(jī)分成4組：(1)缺血再灌注組(I/R組，n=8)：大鼠行第一次麻醉后不做其它進(jìn)一步處理，24小時后予以再次麻醉，并開腹用微血管夾阻斷肝左中葉入肝血流，1小時后松開血管夾予再灌注3小時；(2)非創(chuàng)傷性肢體缺血預(yù)處理組(NIPC組，n=

2、8)：予第一次麻醉后用止血帶捆綁大鼠雙后肢至股動脈觸及不到，阻斷血流5分鐘后松開恢復(fù)血流5分鐘，反復(fù)3次；24小時后處理同I/R組；(3)NIPC+5-HD組(n=8)：在第一次麻醉后，予行NIPC前10分鐘內(nèi)使用注射器經(jīng)大鼠腹腔注入特異性mitoKATP通道阻滯劑5-HD(5mg/kg)，余處理同NIPC組；(4)假手術(shù)組(S組，n=8)：僅行二次麻醉且于第二次麻醉后開腹分離肝蒂，不做其它進(jìn)一步處理。 各組大鼠開腹行肝臟缺血1

3、h和再灌注3h后，取下腔靜脈血2ml，并切取肝左中葉留作實驗指標(biāo)檢測：(1)采用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)與乳酸脫氫酶(LDH)活性；(2)用黃嘌呤氧化酶法測定肝組織超氧化物岐化酶(SOD)活性及 TBA法測定肝組織丙二醛(MDA)含量；(3)應(yīng)用烤箱測定肝臟的濕干比(W/D)；(4)采用免疫組織化學(xué)方法檢測肝組織Bcl-2蛋白表達(dá)，TUNEL法檢測肝細(xì)胞凋亡；(5)肝臟經(jīng)HE切片染色后行光鏡檢查，觀察肝組織顯微結(jié)構(gòu)。

4、 結(jié)果: I/R組大鼠肝臟經(jīng)缺血再灌注后血清AIT與LDH活性、肝組織的MDA 含量與W/D比值以及肝細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)均明顯高于S組(P<0.01)，肝組織SOD活性則明顯低于S組(P<0.01)，光鏡下的顯微結(jié)構(gòu)亦損傷明顯：NIPC組的各項肝組織損傷指標(biāo)均明顯好于I/R組(P<0.05及P<0.01)，AI值明顯低于I/R組(P<0.01)，BCl-2蛋白表達(dá)高于其它各組(P<0.01)；NIPC+5-HD組肝損傷指標(biāo)均差