旋毛形線蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)代謝分泌抗原中血清學(xué)抗原的鑒定.pdf

1、目的:采用免疫共沉淀偶聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)分離和鑒定旋毛形線蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)代謝分泌抗原，為篩選和鑒定旋毛形線蟲(chóng)病的有效診斷抗原及疫苗候選分子奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:1.旋毛形線蟲(chóng)感染新西蘭兔，采用硫酸銨沉淀法分離血清IgG;從感染肌肉中分離純化肌幼蟲(chóng)并培養(yǎng)收集代謝分泌抗原。2.免疫共沉淀和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離代謝分泌抗原。3.質(zhì)譜技術(shù)鑒定各蛋白質(zhì)條帶，利用肽片段質(zhì)譜圖分析鑒定血清學(xué)抗原。
　　 結(jié)果:1.間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢

2、測(cè)旋毛形線蟲(chóng)感染新西蘭兔的血清抗體達(dá)1∶6400以上;采用硫酸銨沉淀法使兔血清IgG得到有效的分離。2.制備的代謝分泌抗原經(jīng)電泳分離鑒定在約175kDa、83kDa、60 kDa、32kDa處存在4條較清晰的蛋白質(zhì)條帶，提示旋毛形線蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)培養(yǎng)24h后獲得了代謝分泌抗原。3.免疫共沉淀的旋毛形線蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)代謝分泌抗原經(jīng)電泳分離獲得5條較清晰的蛋白質(zhì)條帶，免疫印跡分析發(fā)現(xiàn)在40kDa至60kDa之間存在旋毛形線蟲(chóng)感染血清識(shí)別、正常兔血清不識(shí)

3、別的2條較強(qiáng)的蛋白質(zhì)條帶。4.切取約40kDa和約55kDa處的蛋白質(zhì)條帶進(jìn)行酶解和串聯(lián)質(zhì)譜分析，獲得4種蛋白質(zhì)分子，分別為絲氨酸蛋白酶、肌幼蟲(chóng)特異性絲氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代謝分泌抗原。
　　 結(jié)論:1.旋毛形線蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)代謝分泌抗原經(jīng)分離和鑒定獲得4種蛋白質(zhì)分子，分別為絲氨酸蛋白酶、肌幼蟲(chóng)特異性絲氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代謝分泌抗原。2.免疫共沉淀偶聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可有效分離和鑒定旋毛形線蟲(chóng)