DENV2感染的埃及伊蚊唾液腺差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、【目的】構(gòu)建埃及伊蚊（Aedes aegypti）雌蚊感染登革Ⅱ型病毒（dengue virus typeⅡ，DENV2）前后唾液腺（salivary gland，SG）差異蛋白質(zhì)組圖譜，篩選與DENV2感染相關(guān)的唾液腺蛋白。
　　【方法】采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)白紋伊蚊C6/36細(xì)胞以增殖DENV2，采用PCR技術(shù)和免疫熒光技術(shù)證實(shí)DENV2的感染，以TCID50法檢測(cè)感染細(xì)胞的登革病毒滴度；采用胸腔微注射法將一定滴度的病毒注射入5

2、日齡埃及伊蚊雌蚊（生理鹽水為對(duì)照組）。14日后，解剖蚊唾液腺，采用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）技術(shù)聯(lián)合二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，構(gòu)建DENV2感染的埃及伊蚊唾液腺差異蛋白組圖譜，并對(duì)鑒定的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　【結(jié)果】
　　1、DENV2在C6/36細(xì)胞增殖成功，TCID50為10-6；
　

3、　2、DENV2成功感染埃及伊蚊雌蚊唾液腺；
　　3、質(zhì)譜分析結(jié)果顯示共鑒定到埃及伊蚊唾液腺蛋白1350個(gè)蛋白質(zhì)，其中有定量信息的有1330個(gè)。以差異表達(dá)上調(diào)≥1.2倍、差異表達(dá)下調(diào)≤0.8倍為標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出9個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中2個(gè)表達(dá)下調(diào)蛋白（無功能線索），7個(gè)表達(dá)上調(diào)蛋白。上調(diào)的蛋白主要參與蚊蟲氧化還原、免疫、代謝等相關(guān)功能。
　　【結(jié)論】成功構(gòu)建埃及伊蚊雌蚊感染登革Ⅱ型病毒前后唾液腺差異蛋白質(zhì)組圖譜，獲得可能受DEN