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文檔簡介
1、目的: (1)觀察完全性截癱大鼠脊髓提取液對新生大鼠背根節(jié)神經元(DRGNs)軸突生長的影響; (2)觀察聯合應用Rho—ROCKⅡ和GSK—3β抑制劑對大鼠背根節(jié)神經軸突再生和延長的影響。 方法: (1)健康雌性SD成年大鼠15只,隨機分為:手術癱瘓組(5只)、假手術對照組(5只)和正常組(5只)。WD法制成SD大鼠T9平面完全性截癱的脊髓損傷動物模型,造模7d后取T8—10節(jié)段脊髓制作脊髓提取液。
2、 (2)新生大鼠DRGNs體外培養(yǎng):取新生SD大鼠(<5d),顯微操作下取胸腰段背根節(jié)(20~25個/只),酶解消化、機械吹打、離心、重懸、純化,進行元代培養(yǎng)觀察與鑒定。 (3)實驗一分組:A組,DRGNs+PBS;B組,DRGNs+正常脊髓提取液:C組,DRGNs+假手術脊髓提取液;D組,DRGNs+完全性截癱大鼠脊髓提取液。 (4)實驗二分組:A組,DRGNs+PBS;B組,DRGNs+完全性截癱大鼠脊髓提取液;
3、C組,DRGNs+完全性截癱大鼠脊髓提取液+Y26732;D組,DRGNs+完全性截癱大鼠脊髓提取液+TDZD—8;E組,DRGNs+完全性截癱大鼠脊髓提取液+Y26732+TDZD—8。 (5)觀察指標:共同培養(yǎng)1、2d后相差顯微鏡下照相、固定后免疫熒光,觀察神經軸突長度、TubulinβⅢ陽性表達以及軸突遠端平均熒光密度,實驗結果采用SPSS13.0統計軟件做單因素方差分析。 結果: (1)實驗一各組共同培養(yǎng)
4、1d平均神經軸突長度:A組為144±28um,B組為134±11um,C組為125±30um,D組為47±5um;共同培養(yǎng)2d后:A組為211±21um,B組為182±15um,組為156±13um,D組80±8um。共同培養(yǎng)1、2d后,D組和A、B、C組之間分別比較差別有顯著性;C組和A、B組之間分別比較差別有統計學意義;A和B組之間比較差別無統計學意義。共同培養(yǎng)2d后,軸突遠端平均熒光密度分別是:A組為200.4±4.0AFU/um
5、,B組為199.2±6.6 AFU/um,C組為194.6±7.0AFU/um;D組為75.1±4.1AFU/um。在A組和B組中,神經軸突干和生長錐的TubulinβⅢ陽性表達強,而C組中TubulinβⅢ陽性表達弱,D組比C組TubulinβⅢ陽性表達更弱,特別在軸突遠端和生長錐。D組和A、B、C組之間分別比較差別有顯著性; A、B、C組之間比較差別無統計學意義。 (2)實驗二各組共同培養(yǎng)2d后平均神經軸突長度:A組為402
6、±33um,B組為125±18um,C組為404±14um,D組為398±41um,E組為405±12um。B與其他組之間兩兩比較均有顯著統計學意義;C、D、E組之間比較無統計學意義。共同培養(yǎng)2d后,軸突遠端平均熒光密度分別是:A組為208.2±5.6 AFU/Um,B組為67.1±4.2 AFU/um,C組為362.6±5.6 AFU/um,D組為365.6±39.3AFU/um,E組為379.8±23.6 AFU/um。在A、C、D
7、和E組中,神經軸突干和生長錐的TubulinβⅢ陽性表達強,而B組中TubulinβⅢ陽性表達弱,特別在軸突遠端和生長錐。B組和其他組差別均有顯著統計學意義,E組和A、C、D組差別有統計學意義。 結論: (1)完全癱瘓脊髓提取液能明顯抑制DRGNs軸突生長,導致生長錐塌陷;假手術脊髓提取也能輕度抑制軸突生長,但生長錐無明顯塌陷;正常脊髓不影響軸突生長。 (2)30uMY27632能明顯促進軸突生長,形成細長的生長
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