巢蛋白在阿霉素腎病大鼠腎組織中的表達(dá)以及霉酚酸酯干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的： 以阿霉素腎病大鼠建立微小病變腎病模型，以霉酚酸酯(MMF)進(jìn)行干預(yù)，檢測大鼠腎組織中巢蛋白(nestin)的表達(dá)。探討足細(xì)胞損傷產(chǎn)生蛋白尿的機(jī)制以及MMF的治療作用。 方法： 雄性wistar大鼠36只，隨機(jī)分為3組：腎病組、治療組、正常組，每組12只。腎病組、治療組大鼠于實驗開始時(0天)一次性尾靜脈注射阿霉素6.5mg/kg，正常組尾靜脈注射等量生理鹽水。治療組大鼠于注藥次日開始MMF灌胃，劑量20m

2、g/(kg·d)，每日1次；腎病組、正常組大鼠每日生理鹽水灌胃。每組于第0天、7天、14天、21天、28天代謝籠留取24小時尿檢測尿蛋白排泄量，每組于14天、21天、28天各處死大鼠4只，取腎皮質(zhì)，一部分5％戊二醛固定，透射電鏡觀察足細(xì)胞變化；一部分常規(guī)4％多聚甲醛固定，做石蠟切片，HE染色光鏡觀察，免疫組化方法檢測腎組織內(nèi)nestin水平。采用MetaMorphoffline顯微圖像分析系統(tǒng)對腎小球免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析，計算ne

3、stin陽性表達(dá)的相對含量。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；多組資料間比較采用方差分析(One-WayANOVA)，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： ①體重：實驗開始時三組大鼠體重?zé)o顯著性差異，從第7天至觀察結(jié)束，正常組大鼠體重隨飼養(yǎng)逐漸增長，腎病組和治療組體重逐漸下降，與正常組的體重變化有顯著性差異；腎病組與治療組之間體重變化無顯著性差異。②24小時尿蛋白排泄量：實驗開始時三組大鼠

4、24小時尿蛋白排泄量無顯著性差異。從第14天開始至觀察結(jié)束，腎病組和治療組大鼠尿蛋白明顯升高，與正常組比較有顯著性差異。腎病組大鼠從14天至觀察結(jié)束尿蛋白持續(xù)增加。治療組大鼠尿蛋白始終低于腎病組，治療組尿蛋白在14天開始增加，21天達(dá)高峰，28天下降，低于21天水平。③病理改變：光鏡觀察可見腎病組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，近曲小管上皮細(xì)胞胞質(zhì)略顯疏松；治療組與正常組相比，腎小球結(jié)構(gòu)無明顯差異。電鏡觀察可見正常組大鼠腎小球濾過膜結(jié)構(gòu)完整，上

5、皮細(xì)胞足突清晰。腎病組大鼠腎小球上皮細(xì)胞足突廣泛融合，基底膜正常。治療組大鼠腎小球上皮細(xì)胞足突部分融合，但病變較輕。④nestin表達(dá)相對含量：免疫組化結(jié)果提示從第14天開始，腎病組和治療組大鼠nestin表達(dá)明顯增加，與正常組比較有顯著性差異。治療組大鼠nestin表達(dá)低于腎病組，有顯著性差異。⑤經(jīng)Pearson相關(guān)分析顯示，大鼠腎小球nestin陽性表達(dá)量與大鼠24小時尿蛋白排泄量呈正相關(guān)。 結(jié)論： 腎小球足細(xì)胞損傷