Nephrin在阿霉素腎病大鼠腎組織中的表達以及霉酚酸酯對其的影響.pdf

1、目的：
　　 以阿霉素腎病大鼠建立微小病變腎病模型，以霉酚酸酯（MMF）進行干預，檢測大鼠腎組織中nephrin的表達。探討足細胞損傷產生蛋白尿的機制以及MMF的治療作用。
　　 方法：
　　 將36只雄性Wistar大鼠隨機分為3組：A組（阿霉素腎病組）、B組（霉酚酸酯干預組）、C組（正常對照組），各組均12只。A組、B組大鼠于實驗開始時（0天）按Bertain方法制作腎病模型，即一次性尾靜脈注射阿霉素6.5m

2、g/kg，C組尾靜脈注射等量生理鹽水。B組大鼠于注藥次日（實驗第1天）開始MMF灌胃，按劑量20m/（kg-d），每日1次，共28天；同時A組、C組大鼠每日予0.4ml生理鹽水灌胃。將各組大鼠于實驗第0、7、14、21、28天置于代謝籠，收集24小時尿液，測24小時尿蛋白定量。各組于實驗第14、21、28天分別處死大鼠4只，取腎皮質，一部分5％戊二醛固定，透射電鏡觀察足細胞變化；一部分常規(guī)4％多聚甲醛固定，做石蠟切片，HE染色光鏡檢查，

3、免疫組化方法檢測腎組織內nephrin水平。采用MetaMorph offline顯微圖像分析系統(tǒng)對腎小球免疫組化結果進行半定量分析，計算nephrin陽性表達的相對含量。數據應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料用均數±標準差表示；多組資料間比較采用方差分析（One-Way ANOVA），各組間具備方差齊性，兩兩間比較采用LSD方法；對有相關趨勢的變量采用Pearson相關分析。P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：<

4、br>　　 實驗第14天，A組和B組腎病模型制作成功。①體重：實驗開始時三組大鼠體重無顯著性差異。從第7天至觀察結束，C組大鼠體重隨飼養(yǎng)逐漸增長，A組和B組體重逐漸下降，與C組的體重變化有顯著性差異；A組與B組之間體重變化無顯著性差異。②24小時尿蛋白定量：實驗開始時三組大鼠24小時尿蛋白定量無顯著性差異。從第14天開始至觀察結束，A組和B組大鼠尿蛋白明顯升高，與C組比較有顯著性差異。A組大鼠在第14天尿蛋白增多，第28天達高峰；B組

5、大鼠尿蛋白始終低于A組，其尿蛋白在第14天開始增加，第21天達高峰，但仍維持較低水平，第28天與第21天相比明顯下降。③病理改變：光鏡觀察可見A組和B組大鼠腎小球結構基本正常，與C組相比無明顯差異。電鏡觀察可見C組大鼠腎小球基底膜結構完整，上皮細胞足突清晰；A組大鼠腎小球上皮細胞足突廣泛融合；B組大鼠腎小球上皮細胞足突部分融合，與A組相比病變較輕。④nephrin蛋白表達相對含量：免疫組化結果提示在第14天開始，A組和B組大鼠nephr

6、in蛋白表達明顯下調，與C組比較有顯著性差異；B組大鼠nephrin蛋白表達明顯高于A組，有顯著性差異。⑤nephrin與蛋白尿排泄量相關分析：大鼠腎小球nephrin陽性表達含量與24小時尿蛋白排泄量呈負相關，隨著尿蛋白的恢復，ncphrin的表達亦逐漸恢復。
　　 結論：
　　 腎小球足細胞損傷時，足細胞內nephrin表達下調，隨病情好轉而表達恢復，nephrin的表達與尿蛋白呈負相關。MMF可以減輕足細胞損傷，增