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文檔簡介
1、目的:
以阿霉素腎病大鼠建立微小病變腎病模型,以霉酚酸酯(MMF)進行干預,檢測大鼠腎組織中nephrin的表達。探討足細胞損傷產生蛋白尿的機制以及MMF的治療作用。
方法:
將36只雄性Wistar大鼠隨機分為3組:A組(阿霉素腎病組)、B組(霉酚酸酯干預組)、C組(正常對照組),各組均12只。A組、B組大鼠于實驗開始時(0天)按Bertain方法制作腎病模型,即一次性尾靜脈注射阿霉素6.5m
2、g/kg,C組尾靜脈注射等量生理鹽水。B組大鼠于注藥次日(實驗第1天)開始MMF灌胃,按劑量20m/(kg-d),每日1次,共28天;同時A組、C組大鼠每日予0.4ml生理鹽水灌胃。將各組大鼠于實驗第0、7、14、21、28天置于代謝籠,收集24小時尿液,測24小時尿蛋白定量。各組于實驗第14、21、28天分別處死大鼠4只,取腎皮質,一部分5%戊二醛固定,透射電鏡觀察足細胞變化;一部分常規(guī)4%多聚甲醛固定,做石蠟切片,HE染色光鏡檢查,
3、免疫組化方法檢測腎組織內nephrin水平。采用MetaMorph offline顯微圖像分析系統(tǒng)對腎小球免疫組化結果進行半定量分析,計算nephrin陽性表達的相對含量。數據應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,計量資料用均數±標準差表示;多組資料間比較采用方差分析(One-Way ANOVA),各組間具備方差齊性,兩兩間比較采用LSD方法;對有相關趨勢的變量采用Pearson相關分析。P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
結果:<
4、br> 實驗第14天,A組和B組腎病模型制作成功。①體重:實驗開始時三組大鼠體重無顯著性差異。從第7天至觀察結束,C組大鼠體重隨飼養(yǎng)逐漸增長,A組和B組體重逐漸下降,與C組的體重變化有顯著性差異;A組與B組之間體重變化無顯著性差異。②24小時尿蛋白定量:實驗開始時三組大鼠24小時尿蛋白定量無顯著性差異。從第14天開始至觀察結束,A組和B組大鼠尿蛋白明顯升高,與C組比較有顯著性差異。A組大鼠在第14天尿蛋白增多,第28天達高峰;B組
5、大鼠尿蛋白始終低于A組,其尿蛋白在第14天開始增加,第21天達高峰,但仍維持較低水平,第28天與第21天相比明顯下降。③病理改變:光鏡觀察可見A組和B組大鼠腎小球結構基本正常,與C組相比無明顯差異。電鏡觀察可見C組大鼠腎小球基底膜結構完整,上皮細胞足突清晰;A組大鼠腎小球上皮細胞足突廣泛融合;B組大鼠腎小球上皮細胞足突部分融合,與A組相比病變較輕。④nephrin蛋白表達相對含量:免疫組化結果提示在第14天開始,A組和B組大鼠nephr
6、in蛋白表達明顯下調,與C組比較有顯著性差異;B組大鼠nephrin蛋白表達明顯高于A組,有顯著性差異。⑤nephrin與蛋白尿排泄量相關分析:大鼠腎小球nephrin陽性表達含量與24小時尿蛋白排泄量呈負相關,隨著尿蛋白的恢復,ncphrin的表達亦逐漸恢復。
結論:
腎小球足細胞損傷時,足細胞內nephrin表達下調,隨病情好轉而表達恢復,nephrin的表達與尿蛋白呈負相關。MMF可以減輕足細胞損傷,增
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