胚胎先天性神經(jīng)管缺陷PLA2、COX-2表達(dá)及基因治療.pdf

1、目的:
　　研究PLA2、COX-2基因在胚胎先天性神經(jīng)管缺陷大鼠的表達(dá),探討PLA2、COX-2基因?qū)ε咛ド窠?jīng)管缺陷大鼠模型的影響機(jī)制。
　　方法:
　　24只SD雌性大鼠分組分為3組:第一組為正常對(duì)照組,8只,正常飼養(yǎng),妊娠12日后共取出80只大鼠胚胎,做HE染色觀察胚胎形態(tài)學(xué)及免疫熒光染色的方法觀察PLA2、COX-2表達(dá);第二組為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M,8只,受孕后第6天經(jīng)過(guò)尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)構(gòu)建先天性神經(jīng)管缺

2、陷組大鼠,妊娠12日后共取出80胚胎,做HE染色觀察胚胎形態(tài)學(xué)及免疫熒光染色的方法觀察PLA2、COX-2表達(dá),第三組為基因治療組,受孕第6天經(jīng)過(guò)尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)構(gòu)建先天性神經(jīng)管缺陷組大鼠,妊娠12日后共取出80胚胎,離體培養(yǎng)1周后提取各組胚胎的卵黃囊細(xì)胞的mRNA,通過(guò)PCR技術(shù)對(duì)PLA2、COX-2基因水平分析,應(yīng)用Western blotting技術(shù),對(duì)卵黃囊細(xì)胞PLA2、COX-2蛋白表達(dá)水平檢測(cè),通過(guò)免疫熒光檢測(cè)

3、對(duì)胚胎進(jìn)行觀察分析。采用四表格χ2檢驗(yàn)比較正常組與糖尿病組之間大鼠胚胎神經(jīng)管發(fā)育的差異,PLA2、COX-2在胚胎神經(jīng)管缺陷中表達(dá)的差異,比較轉(zhuǎn)基因治療前后PLA2、COX-2在胚胎神經(jīng)管缺陷中表達(dá)的差異。使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.1進(jìn)行處理,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,p＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1.通過(guò)鏈脲佐菌素(STZ)構(gòu)建的先天性神經(jīng)管缺陷組大鼠成功實(shí)現(xiàn)。
　　2.正常對(duì)照組大鼠胚胎神經(jīng)管發(fā)育形

4、態(tài)學(xué)分析正常,糖尿病胚胎神經(jīng)管發(fā)育明顯異常,兩者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　3.胚胎前列腺素酶PLA2及前列腺素合成酶COX-2在實(shí)驗(yàn)糖尿病組中表達(dá)較正常組下降,兩者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　4.免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)在接受基因治療后的神經(jīng)管缺陷胚胎PLA2、COX-2基因表達(dá)比轉(zhuǎn)基因治療前明顯增強(qiáng),兩者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　PLA2、COX-2基因表達(dá)在SD大鼠神