MAZ基因在前列腺癌中的功能及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、背景：
　　 前列腺癌(Prostatecancer，PCa)是男性的一個(gè)重要疾病，每年在全球?qū)е麓罅康哪行运劳觥Ｔ诿绹?guó)前列腺癌發(fā)病率占男性惡性腫瘤的第一位，死亡率占第二位，僅次于肺癌。我國(guó)前列腺癌發(fā)病率較低，但是近年來(lái)隨著人民生活水平的提高、人口老齡化、飲食結(jié)構(gòu)的變化以及醫(yī)療檢測(cè)水平的提高，PCa發(fā)病率正呈逐年上升趨勢(shì)。PCa正悄悄地影響著我國(guó)50歲以上男性的生活質(zhì)量和預(yù)期壽命，成為泌尿外科領(lǐng)域一個(gè)越來(lái)越重要的課題。
　

2、　 PCa區(qū)別于其它腫瘤的一個(gè)顯著特點(diǎn)是：生物學(xué)行為高度異質(zhì)性且無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)。有些PCa在1～2年內(nèi)迅速進(jìn)展：有些卻可終生未被發(fā)現(xiàn)，不威脅生命。PCa另一顯著特點(diǎn)是在PCa的早期階段，前列腺癌的進(jìn)展依賴于雄激素。目前對(duì)早期局限性的PCa多采用前列腺癌根治術(shù)或根治性放療以期達(dá)到治愈的目的，對(duì)于進(jìn)展期的PCa則主要采用手術(shù)或藥物去勢(shì)的雄激素剝奪的治療方法，初期可以取得較為滿意的效果，但是經(jīng)過(guò)12～18個(gè)月的抗雄治療后PCa將不可避免地從激

3、素依賴性轉(zhuǎn)變?yōu)榧に胤且蕾囆郧傲邢侔?，最終導(dǎo)致患者死亡。目前認(rèn)為PCa的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)涉及多因素、多步驟的異常復(fù)雜的過(guò)程，不僅與遺傳因素有關(guān)，還受年齡、種族、飲食習(xí)慣、環(huán)境等因素的影響。到目前為止，還有很多和PCa的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的機(jī)制尚未闡明。
　　 MAZ(Myc-associatedZinc-fingerprotein)基因位于人染色體16p11.2，基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為2.7kb的mRNA，編碼477個(gè)氨基酸、分子量為60kd

4、的MAZ蛋白。MAZ基因在人的心臟、腦、肺、肝、骨骼肌、胰腺和前列腺組織中均有表達(dá)，已有的研究結(jié)果表明，MAZ基因的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。MAZ蛋白對(duì)一些基因的啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄具有重要的調(diào)節(jié)作用，如C-MYC、RAG-2、5-羥色胺1α受體、ENT-1、CLC-K1、phenylethanolamineN-methyltransferase(PNMT)和PPAR-γ1等，同時(shí)MAZ蛋白對(duì)某些基因的終止轉(zhuǎn)錄也發(fā)揮著重要作用，如end

5、othelialnitric-oxidesynthase(eNOS)、Sp4、端粒酶等。因此MAZ是在啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄和終止基因轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中發(fā)揮著雙重作用的轉(zhuǎn)錄因子。
　　 目前MAZ基因在PCa發(fā)生、發(fā)展及由激素敏感性PCa向非敏感性癌轉(zhuǎn)化的過(guò)程中的表達(dá)及其作用機(jī)理研究尚未見(jiàn)專題報(bào)道，因此有必要通過(guò)研究MAZ基因?qū)η傲邢侔┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響，闡明MAZ在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制，進(jìn)一步探索PCa發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，為尋

6、找新的PCa基因治療靶點(diǎn)和新的PCa預(yù)測(cè)因子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 目的：
　　 探討MAZ在PCa發(fā)生、發(fā)展及由激素敏感性向非敏感性轉(zhuǎn)化中的表達(dá)及作用機(jī)理、MAZ和雄激素受體之間相互作用的關(guān)系，探索PCa發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，為尋找新的PCa基因治療靶點(diǎn)、尋找新的PCa預(yù)后因子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 1、用QPCR方法檢測(cè)MAZ在15對(duì)激素依賴性前列腺癌組織和癌旁組織中表達(dá)的差異。用免疫組

7、化方法檢測(cè)MAZ在40例激素依賴性PCa、10例激素非依賴PCa、10例前列腺增生和8例PIN石蠟切片中表達(dá)的差異。
　　 2、應(yīng)用quantitativeRT-PCR技術(shù)檢測(cè)5株前列腺癌細(xì)胞系和2株正常前列腺細(xì)胞系中MAZmRNA表達(dá)量，從中篩選出表達(dá)量高的細(xì)胞株，用小RNA干擾技術(shù)干擾MAZ基因的表達(dá)，通過(guò)觀察和分析前列腺癌細(xì)胞株在增殖、凋亡、細(xì)胞周期、平板克隆形成、侵襲和遷移能力方面的變化，研究MAZ對(duì)前列腺癌細(xì)胞株生物學(xué)

8、行為的影響。
　　 3、采用quantitativeRT-PCR的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)人前列腺癌組織、癌旁組織中MAZ、AR的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，以明確MAZ和AR兩者表達(dá)量之間的關(guān)系。通過(guò)干擾LNCaP-AD細(xì)胞中AR基因的表達(dá)，用quantitativeRT-PCR、Westernblot檢測(cè)MAZ表達(dá)變化，同時(shí)用小RNA干擾技術(shù)干擾LNCaP-AD細(xì)胞中MAZ基因的表達(dá)，檢測(cè)AR表達(dá)變化，以探討MAZ基因在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中是否和A

9、R基因相關(guān)。
　　 結(jié)果：
　　 1、MAZ在15對(duì)ADPC組織和癌旁組織中的表達(dá)存在差異，在ADPC中表達(dá)較高(P＜0.05)。免疫組化染色后經(jīng)過(guò)病理學(xué)半定量免疫組化評(píng)分發(fā)現(xiàn)MAZ在PIN中的表達(dá)較高，有些達(dá)到強(qiáng)陽(yáng)性，明顯高于BPH組織(P=0.0115)，MAZ在ADPC三組內(nèi)部比較(Gleason評(píng)分＜7、=7、＞7)及三個(gè)樣本間兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而在ADPC和AIPC比較則有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.0406)，

10、MAZ在ADPC中的表達(dá)高于AIPC組織。
　　 2、用QPCR方法檢測(cè)在了上述5株前列腺癌細(xì)胞系和2株正常前列腺細(xì)胞系中MAZmRNA表達(dá)量，結(jié)果示MAZmRNA在有AR表達(dá)的LNCaP-AD細(xì)胞和C4-2細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量較高，而在高度轉(zhuǎn)移潛能且無(wú)AR表達(dá)的PC3細(xì)胞系中表達(dá)最低。用RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染干擾MAZ基因的715siRNA后LNCaP-AD細(xì)胞的遷移和侵襲能力明顯減弱，LNCaP-AD的增殖明顯受到抑制，克隆形成率

11、也明顯降低，和對(duì)照的NC組和MOCK組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染715siRNA組的的凋亡率高于轉(zhuǎn)染NC組和MOCK組(P＜0.05)。細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染siRNA715組LNCaP-AD細(xì)胞處于S期的細(xì)胞數(shù)與轉(zhuǎn)染NC組和MOCK組比較明顯減少(P＜0.05)，細(xì)胞被阻滯于G0-G1期。
　　 3、采用quantitativeRT-PCR的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)15對(duì)人前列腺癌組織、癌旁組織中MAZ、AR的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)

12、果兩者的表達(dá)量呈正相關(guān)。通過(guò)干擾LNCaP-AD細(xì)胞中AR基因的表達(dá)，用quantitativeRT-PCR、Westernblot檢測(cè)MAZ表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MAZ基因表達(dá)下調(diào)，和對(duì)照的NC組和MOCK組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。用小RNA干擾技術(shù)干擾LNCaP-AD細(xì)胞中MAZ基因的表達(dá)，檢測(cè)AR表達(dá)，發(fā)現(xiàn)AR基因表達(dá)上調(diào)，和對(duì)照的NC組和MOCK組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 MAZ在前列