乳腺癌細(xì)胞GLUT1分子成像實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 1、檢測并比較乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(Glutl)表達(dá)情況,揭示乳腺癌Glutl表達(dá)與惡性程度的關(guān)系,選擇Glutl過表達(dá)最顯著的細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　 2、評價(jià)熒光物質(zhì)標(biāo)記的2-脫氧-D-葡萄糖(2-DG)即2-NBDG被高表達(dá)Glutl乳腺癌細(xì)胞靶向攝取的可行性,以此證實(shí)2-DG分子能被Glutl高表達(dá)腫瘤細(xì)胞靶向攝取。
　　 3、探索用2-DG標(biāo)記USP

2、IO構(gòu)建靶向分子磁共振成像探針2-脫氧葡萄糖-超小超順磁性氧化鐵(2-DG-USPIO)可行性。
　　 4、探索分子磁共振成像探針2-DG-USPIO靶向Glutl高表達(dá)乳腺癌細(xì)胞的效果。
　　 材料和方法:
　　 1、RT-PCR及免疫組化檢測乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞GlutlmRNA和蛋白表達(dá),Westernblot比較乳腺癌MDA-MB-231及MCF-7細(xì)胞Glutl蛋白表達(dá)量。
　　 2、

3、2-NBDG孵育接種在六孔板里的人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,并用D葡萄糖進(jìn)行競爭抑制對照,熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀觀察、分析2-NBDG攝取結(jié)果。流式細(xì)胞儀檢測比較MDA-MB-231及MCF-7細(xì)胞吸收2-NBDG量的差異。
　　 3、采用化學(xué)交聯(lián)法制備分子磁共振成像探針2-DG-USPIO,電鏡觀察形態(tài)、測量粒徑及近紅外光譜分析表征。
　　 4、分別用2-DG-USPIO、單純USPIO孵育人乳腺癌MDA-MB-

4、231細(xì)胞10分鐘至2小時(shí)后普魯士藍(lán)染色及體外磁共振成像檢測人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)吸收情況,電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)吸收鐵的分布。
　　 結(jié)果:
　　 1、乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞均有明顯GlutlmRNA和蛋白過表達(dá)。Westernblot測得MDA-MB-231細(xì)胞表達(dá)Glutl蛋白表達(dá)量為(0.946±0.007),高于MCF-7細(xì)胞Glutl蛋白表達(dá)量(0.833±0.010)。

5、　　 2、熒光成像及流式細(xì)胞儀分析顯示MDA-MB-231能快速攝取2-NBDG,且50 mM D型葡萄糖競爭抑制后,攝取2-NBDG的熒光強(qiáng)度降低46％。2-NBDG孵育乳腺癌細(xì)胞20分鐘后流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示MDA-MB-231熒光強(qiáng)度(25.10±0.57)明顯高于MCF-7(10.12±0.62)。
　　 3、電鏡觀察2-DG-USPIO納米粒子成球形,平均粒徑為10nm,近紅外光譜分析證明2-DG-USPIO納米粒

6、子表面存在2-DG結(jié)構(gòu)。
　　 4、2-DG-USPIO孵育MDA-MB-231細(xì)胞10分鐘后普魯士藍(lán)染色即顯示胞漿內(nèi)大量藍(lán)色顆粒,單純USPIO未見明顯藍(lán)色顆粒。臨床1.5T磁共振T2加權(quán)成像顯示2-DG-USPIO孵育MDA-MB-231組較單純USPIO孵育MDA-MB-231組信號明顯下降。
　　 結(jié)論:
　　 1、乳腺癌細(xì)胞Glutl表達(dá)程度與細(xì)胞的惡性程度密切相關(guān),細(xì)胞惡性程度越高,Glutl蛋白表達(dá)