應(yīng)激活化的P38MAPK在DTT與順鉑誘導(dǎo)食管癌Eca109細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)激活化的P38MAPK在DTT與順鉑誘導(dǎo)食管癌Eca109細(xì)胞凋亡中的作用姓名：馮若申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：張欽憲史學(xué)義20030501鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)激活化的P38MAPK在l丌r與順鉑誘導(dǎo)食管癌Ecal09細(xì)胞凋亡中的作用組。繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，收集細(xì)胞進(jìn)行免疫組化檢測磷酸化I38MAI，K和I)NA抽提以瓊脂糖凝膠電泳檢測DNAladder。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。免疫組化的操作按北京中山生

2、物制劑有限公司提供的步驟進(jìn)行。第二階段實(shí)驗(yàn)：為進(jìn)一步了解P38MAPK在DTT和順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用，應(yīng)用磷酸化P38特異性抑制劑SB203580抑制磷酸化P38的活性，觀察磷酸化P38的活性抑制前后細(xì)胞凋亡率的變化。將培養(yǎng)的細(xì)胞平均分為八組：其中四組與第一階段一致，另有一組為單獨(dú)用DMSO處理組，余下組別分別用10ug／m1SB203580先孵育2小時(shí)，再分別用2mmol／1的DTT，lOug／ml的順鉑及二藥聯(lián)合處理細(xì)胞。繼續(xù)

3、培養(yǎng)24小時(shí)后收集，應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率。應(yīng)用sI’ssl00軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以n=O05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，運(yùn)用秩和檢驗(yàn)和X2檢驗(yàn)分別對(duì)免疫組化數(shù)據(jù)和流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1第一階段實(shí)驗(yàn)結(jié)果1115％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果、用從DTT，順鉑及二者聯(lián)合用藥處理三組提取的DNA進(jìn)行電泳，結(jié)果均呈明顯的ladder狀，提示這三組均有明顯凋亡存在，而對(duì)照組則末檢測到DNAladder。表明DTT和順鉑均能誘導(dǎo)

4、食管癌Ecal09細(xì)胞凋亡。12顯微鏡觀察結(jié)果121免疫組化結(jié)果以辣根過氧化物酶顯色系統(tǒng)顯示磷酸化P38MAPK的免疫組化信號(hào)為棕黃色顆粒。結(jié)果顯示，DTT和順鉑均能明顯提高P38MAPK的磷酸化水平。其中對(duì)照組陽性細(xì)胞數(shù)約為10％，DTT，順鉑及二者聯(lián)合用藥處理三組陽性細(xì)胞數(shù)約為50％。與對(duì)照組相比，藥物處理組的P38MAPK磷酸化水平均明顯提高(pO05)。122觀察細(xì)胞定位DTT組：棕黃色顆粒主要存在于細(xì)胞核內(nèi)，近胞膜處亦可見棕黃