犬尿氨酸酶活性與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：通過對原發(fā)性高血壓易感基因的定位研究，發(fā)現(xiàn)色氨酸犬尿氨酸代謝途徑中的犬尿氨酸酶基因Argl88Gln(G669A)多態(tài)可能與某些高血壓家系的高血壓發(fā)生、發(fā)展相關(guān)聯(lián)。為明確此單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphism，SNP)是否改變?nèi)虬彼崦傅幕钚?、從而影響犬尿氨酸代謝通路中其他酶以及代謝產(chǎn)物的功能，引起中樞血壓調(diào)節(jié)的紊亂而在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用，本研究課題著重開展對犬尿氨酸酶功能的

2、研究。 方法：用高效液相色譜法檢測犬尿氨酸酶的活性。構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)野生型與突變型(A略188Gln)犬尿氨酸酶的HEK293細(xì)胞株，并檢測酶的活性進(jìn)行比較。收集犬尿氨酸酶基因Arg188Gln(G669A)多態(tài)高血壓家系成員外周血淋巴細(xì)胞，抽提犬尿氨酸酶，檢測其活性。分析不同基因型酶活性的差異，以及酶活性與高血壓的相關(guān)性。檢測SHR與WKY大鼠腦組織犬尿氨酸酶的活性，應(yīng)用犬尿氨酸酶抑制劑——o-甲氧基苯甲酰丙氨酸(o-metho

3、xybenzoylalanine，oMBA)，觀察抑制劑對酶活性的影響以及對大鼠血壓的影響情況。 結(jié)果：HEK293 細(xì)胞表達(dá)的野生型犬尿氨酸酶的Km值為0.0098min01/L，突變型酶的Km值為0.0299mmol/L，突變型酶的Km值比野生型酶大。犬尿氨酸酶基因Argl88Gln(G669A)多態(tài)高血壓家系成員中，犬尿氨酸酶GG基因型組的Km值為0.1032mmol/L，AA/AG基因型組的Km值為0.0529mmol/

4、L，AA/AG基因型組的Km值比GG基因型組小，兩組差異有顯著性，p<0.001。應(yīng)用oMBA可抑制SHR大鼠腦組織犬尿氨酸酶的活性，與注射生理鹽水組比，酶活性顯著降低，p