2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩66頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領

文檔簡介

1、糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids,GCs)能通過基因組和非基因組機制調(diào)節(jié)細胞的生長、分化、凋亡和粘附等,但是作用機制還沒有完全闡明。真核細胞的空間結(jié)構(gòu)由細胞骨架(cytoskeleton)維持,細胞骨架在胚胎發(fā)育、傷口愈合以及腫瘤發(fā)生等生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。多種細胞外信號,包括趨化因子、激素、生長因子等通過細胞膜受體以及細胞粘附分子(如整合素)等,激活細胞內(nèi)的多條信號轉(zhuǎn)導通路,導致細胞骨架重組,從而調(diào)節(jié)細胞的粘附、運動

2、、生長和凋亡等。 我們實驗室的前期工作發(fā)現(xiàn),人工合成的糖皮質(zhì)激素—地塞米松(dexamethasone,Dex)可以誘導人卵巢癌HO-8910細胞形態(tài)改變(由上皮樣變?yōu)槌衫w維樣),并增強細胞與細胞外基質(zhì)間的粘附能力,但其作用機制卻不是很清楚。本研究擬進一步探討Dex對HO-8910細胞骨架的調(diào)節(jié)作用及其可能的分子機制。 我們首先用羅丹明-鬼筆環(huán)肽(Rhodamine-phalloidin)做細胞骨架肌動蛋白(actin)

3、染色,共聚焦顯微鏡觀察Dex處理不同時間對HO-8910細胞骨架的影響。結(jié)果顯示,未經(jīng)Dex處理的細胞骨架aetin主要分布在細胞膜下,形成一個染色環(huán),10nMDex可誘導細胞骨架actin重組,表現(xiàn)為早期應力纖維的形成(2~8小時),后期(12小時)應力纖維的解聚,actin在胞漿均勻分布,并重新向膜周聚集的動態(tài)過程。 粘附斑激酶(focaladhesionkinase,F(xiàn)AK)與粘附斑和應力纖維的形成有關。我們用磷酸化FAK

4、的抗體,用Westernblots的方法證實Dex能夠快速(20min)增加磷酸化FAK的水平,表明Dex可以通過非基因組機制快速激活FAK,提示FAK的激活與Dex早期誘導HO-8910細胞骨架actin形成應力纖維密切相關。 小G蛋白Rho家族(Rho、Rac和Cdc42等)是細胞骨架調(diào)節(jié)的關鍵因子。它們的激活能促進應力纖維和偽足的形成。RhoB是Rho亞族的成員,我們前期的工作表明,Dex能夠以濃度和時間依賴性的方式誘導R

5、hoB的表達。因此我們進一步觀察了RhoB表達的改變與Dex誘導的HO-8910細胞骨架actin重組的關系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染野生型RhoB表達載體(RhoB-wt)的細胞骨架actin主要在胞漿彌散分布,用10nMDex處理上述細胞,actin在胞漿彌散分布更加明顯,瞬轉(zhuǎn)RhoB的RNA干擾質(zhì)粒表達載體(RhoB-RNAi)對細胞骨架actin沒有明顯影響,用10nMDex處理瞬轉(zhuǎn)RhoB-RNAi的細胞24小時后,可見胞漿有部分應力纖維

6、的形成。上述結(jié)果表明Dex對RhoB的誘導參與了Dex對HO-8910細胞骨架actin重組的調(diào)節(jié),其作用可能與Dex處理后期應力纖維發(fā)生解聚有關。 Rho相關激酶Ⅱ(ROCKⅡ)是Rho下游的效應蛋白,在細胞骨架的重組中發(fā)揮著重要的作用,與應力纖維的形成有關。我們用RT-PCR和Westernblots方法分別檢測Dex對HO-8910細胞的mRNA和蛋白表達的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Dex能夠以濃度和時間依賴的方式上調(diào)ROCKⅡmRN

7、A和蛋白的表達。我們進一步用ROCK特異阻斷劑Y-27632研究了該酶在Dex誘導的細胞骨架actin重組中可能的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)10μMY-27632能夠逆轉(zhuǎn)Dex對HO-8910細胞骨架actin的改變。提示ROCK信號蛋白參與了Dex對HO-8910細胞骨架重組的調(diào)節(jié)。 最后,我們探討了Dex、RhoB與轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性的關系,以及NF-κB在Dex誘導的細胞骨架actin重組方面可能的作用。我們用報告基因(pGL3-

8、NF-κB-luc)檢測NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,發(fā)現(xiàn)生理濃度的Dex能夠上調(diào)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,RhoB過表達或RhoB激活也能使NF-κB的核轉(zhuǎn)位增加,基礎轉(zhuǎn)錄活性增強。而用RNA干擾技術或RhoB顯性失活突變體阻斷RhoB的表達或抑制其活性,NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性則不增加。這些結(jié)果表明在HO-8910細胞中,RhoB能夠上調(diào)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,因此推測Dex增強NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性可能至少部分是通過誘導RhoB的表達來實現(xiàn)的。

9、 轉(zhuǎn)錄因子NF-κB與細胞骨架關系雖有研究報道,但并沒有闡明。為此我們用NF-κB的阻斷劑PDTC進一步觀察了NF-κB在Dex誘導細胞骨架重組中的可能作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)5μM的PDTC可以逆轉(zhuǎn)Dex對HO-8910細胞骨架的重組。上述結(jié)果也提示NF-κB可能參與了Dex對HO-8910細胞骨架的調(diào)節(jié)。我們實驗室以往的工作表明,Dex能夠拮抗順鉑誘導的HO-8910細胞的凋亡,因此我們認為Dex增加細胞粘附,上調(diào)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性可能是

10、Dex保護細胞免于凋亡的機制之一。 綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)Dex能夠誘導HO-8910細胞骨架actin重組,表現(xiàn)為actin從膜周到胞漿分布的改變以及應力纖維的形成與解聚。Dex快速激活FAK可能是Dex誘導細胞早期應力纖維形成的機制之一。Dex能夠誘導RhoB及其下游蛋白ROCKⅡ的表達,RhoB-ROCKⅡ信號轉(zhuǎn)導通路可能參與了骨架actin重組的調(diào)節(jié)。Dex能增強NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,該作用至少部分與誘導RhoB表達增多有關

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論