MUC4在肺腺癌轉移及其上皮間質轉變中的功能研究.pdf

1、目的：
　　肺癌是全球癌癥死亡的主要原因，腺癌是肺癌中最常見的一種類型。MUC4粘附蛋白是一種高分子量跨膜糖蛋白，與多種腫瘤的發(fā)生相關聯(lián)，并且MUC4的過量異常表達常在癌癥的侵襲和轉移過程中被觀察到。上皮間質轉變，是具有極性的上皮細胞轉換為具有運動能力的間充質細胞并獲得侵襲和遷移能力的過程，它存在于動物多個生理和病理過程中，并涉及復雜的信號通路調節(jié)過程，行使多種生理功能。這個過程最初發(fā)現于早期胚胎發(fā)育進展中，并且與組織的纖維化也相

2、關聯(lián)，之后，上皮間質轉變也與惡性腫瘤的侵襲和轉移有關。本研究旨在觀察MUC4在肺腺癌侵襲轉移中的功能作用，同時進一步研究其對上皮間質化的調控機制，為肺腺癌臨床診斷及治療提供新的靶點。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)肺腺癌細胞株，通過Western Blotting試驗，檢測MUC4粘蛋白在肺腺癌細胞株中的高低表達。構建MUC4-siRNA表達載體，經脂質體2000轉染肺腺癌細胞株，分為實驗組（轉染載體MUC4-siRNA）及對照組

3、(空載體Control-siRNA)，Western Blotting試驗檢測MUC4、E-cadherin、Vimentin的表達變化，倒置顯微鏡觀察兩組細胞形態(tài)的變化，細胞遷移實驗觀察MUC4高低表達對細胞運動能力的影響，細胞免疫熒光實驗檢測MUC4高低表達對β-catenin的影響，并且通過Western Blotting試驗檢測β-catenin在細胞膜、細胞質、細胞核的表達變化。動物實驗分為MUC4-knockdown-LTE

4、P種植鼠(129/sv)及MUC4-control-LTEP種植鼠(129/sv)兩組，免疫組化及Western Blotting試驗檢測兩組鼠肺組織中的MUC4、E-cadherin、Vimentin的變化。通過PET-CT從天津市腫瘤醫(yī)院篩選出各15例Ⅰ期及Ⅲ期病人，并取其肺癌組織標本，病理證實Ⅰ期及Ⅲ期肺腺癌標本各10例，Western Blotting試驗檢測20例肺癌組織標本中MUC4粘蛋白的表達變化，通過統(tǒng)計分析20例肺癌組

5、織標本中MUC4粘蛋白高低表達與肺癌淋巴結轉移相關性。
　　結果：
　　1.體外細胞實驗，MUC4粘蛋白在肺腺癌細胞株LTEP、SPCA中高表達，然而在肺腺癌細胞株GLC-82、A549中低表達。MUC4-siRNA經脂質體2000轉染LTEP細胞，LTEP細胞發(fā)生上皮間質轉變，與對照組相比較，MUC4粘蛋白和上皮標記物E-cadherin表達減少，間質標記物Vimentin表達增加;LTEP細胞(轉染MUC4-siRNA)

6、形態(tài)分別從卵圓形轉變?yōu)榧忓N形，細胞極及細胞接觸排列無序。2.細胞遷移實驗:與對照組相比，LTEP細胞(轉染MUC4-siRNA)穿孔細胞數量明顯增多(P＜0.01)。
　　3.細胞免疫熒光及Western Blotting定量實驗:與對照組相比，實驗組LTEP細胞中β-catenin向細胞質集聚及細胞核轉移，與細胞膜結合的β-catenin明顯減少。
　　4.原位動物實驗模型:與MUC4-control-LTEP種植鼠相比，

7、MUC4-knockdown-LTEP種植鼠，腫瘤肺組織中MUC4粘蛋白和上皮標記物E-cadherin表達明顯減少，間質標記物Vimentin表達明顯增加。
　　5.人肺腺癌標本Western Blotting定量實驗:10例無淋巴結轉移的肺腺癌標本中6例MUC4低表達，然而，10例伴隨淋巴結轉移的肺腺癌標本中MUC4全部低表達。統(tǒng)計分析20例肺腺癌標本中MUC4表達與淋巴結轉移相關性，數據顯示MUC4低表達與肺腺癌淋巴結轉移相

8、關（P＜0.01）。
　　結論：
　　1.MUC4粘蛋白低表達可誘導LTEP細胞發(fā)生上皮間質轉化
　　2.隨著MUC4粘蛋白低表達，LTEP細胞穿孔細胞數量明顯增多(P＜0.01)，表明MUC4粘蛋白與肺腺癌細胞侵襲遷移能力有關。
　　3.隨著MUC4粘蛋白低表達，LTEP細胞中β-catenin分別向細胞核轉移及細胞質集聚，與細胞膜結合的β-catenin明顯減少，表明MUC4粘蛋白通過調控β-catenin胞

9、核轉位抑制肺腺癌細胞上皮間質轉化的發(fā)生。
　　4.通過原位動物實驗模型，MUC4-knockdown-LTEP種植鼠肺組織中MUC4粘蛋白的減少伴隨著上皮標記物E-cadherin表達減少，間質標記物Vimentin表達增加，表明在體內試驗中MUC4粘蛋白表達與上皮間質轉化的發(fā)生相關。
　　5.在沒有淋巴結轉移的10例Ⅰ期肺腺癌標本中6例MUC4低表達，然而，在有淋巴結轉移的10例Ⅲ期肺腺癌標本中MUC4全部低表達，并且通過