酒精致大鼠胰島素抵抗及白藜蘆醇干預作用的初步研究.pdf

1、第一部分、慢性酒精攝入致大鼠胰島素抵抗及白藜蘆醇的改善作用
　　目的：以液體飼料為載體，給雄性SD大鼠供給不同劑量的酒精，建立慢性酒精攝入的模型，研究慢性酒精攝入對胰島素抵抗的影響以及白藜蘆醇干預后的改善作用。
　　方法：60只雄性SD大鼠隨機分成以下6組：正常對照組（Con）、低劑量酒精組（Leth,0.8g/kg·bw）、中劑量酒精組（Meth,1.6g/kg·bw）、高劑量酒精組（Heth,2.4g/kg·bw）、白藜

2、蘆醇對照組（Con+Res,100mg/kg·bw）和白藜蘆醇干預組(Heth+Res，Heth:2.4g/kg·bw，Res:100mg/kg·bw)。每天每只大鼠給予含相應干預物的液體飼料約100mL，并且記錄每天的進食量。每周稱量大鼠體重，定期觀察大鼠的健康狀況。21周后進行胰島素耐量和口服葡萄糖耐量實驗，于22周后斷頭處死大鼠，同時每組隨機選取3只在處死前注射胰島素（0.8U/kg.bw），留取血清及肝臟樣本用于檢測血糖、血胰島

3、素、肝糖原以及肝臟中胰島素信號傳導相關分子和SIRT1的蛋白表達情況。
　　結果：
　　1.酒精組大鼠的體重和能量利用率低于正常對照組，但不具有顯著性差異，白藜蘆醇干預后有一定的改善作用；
　　2.胰島素耐量實驗的結果顯示，Heth組的曲線下面積明顯高于Con組的曲線下面積（P<0.05），白藜蘆醇干預后，能有效降低該面積（P<0.05）；
　　3.口服葡萄糖耐量實驗的結果顯示，和Con組對比，Meth和Heth

4、組的曲線下面積均明顯增加（P<0.05，P<0.01），白藜蘆醇干預后，改善作用明顯（P<0.05）；4.酒精作用使得大鼠空腹血糖升高，且Meth和Heth組的升高較明顯（P<0.05，P<0.01），使得大鼠HOMA-IR水平隨酒精劑量的升高而逐漸升高，且高劑量組有顯著性差異（P<0.05），使得大鼠HOMA-β水平均顯著較低（P<0.01），白藜蘆醇干預具有明顯的改善作用。
　　5.酒精作用使得大鼠肝臟貯存糖原的能力明顯降低（

5、P<0.01），白藜蘆醇干預后能有效提高肝臟的糖原貯存能力（P<0.05）。
　　6.酒精作用使得大鼠肝臟中IRS2、PI3K、AKT2和SIRT1的蛋白表達降低，且Meth和Heth組降低較明顯（P<0.05，P<0.01），白藜蘆醇干預具有明顯的改善作用。
　　結論：慢性酒精攝入能導致大鼠胰島素抵抗，白藜蘆醇干預具有明顯的保護作用，且其保護可能與SIRT1被激活有關。
　　第二部分、酒精致大鼠原代肝細胞胰島素抵抗及

6、白藜蘆醇改善研究
　　目的：以酒精孵育的大鼠原代肝細胞為研究對象，研究酒精對胰島素抵抗的影響和白藜蘆醇的干預效果，探討相關機制。
　　方法：二步膠原酶灌注法提取大鼠原代肝細胞，不同濃度酒精（0，10，25，50，100mM）孵育3h和24h，研究酒精代謝酶蛋白表達的變化情況，從而選擇酒精作用合適的濃度和時間來建立胰島素抵抗模型，并探討白藜蘆醇的改善作用。
　　結果：
　　1.不同濃度酒精作用細胞3h和24h后，乙

7、醛脫氫酶2（ALDH2）的變化均不明顯，乙醇脫氫酶（ADH）和微粒體中細胞色素P4502E1（CYP2E1）的變化較明顯，且25mM酒精在3h和24h時對ADH和CYP2E1的影響均具有顯著性的差異（P<0.05，P<0.01）；
　　2.25mM酒精和0.1μM白藜蘆醇分別作用24h均使得大鼠原代肝細胞中p-AKT/AKT的比值降低（P<0.01），但是兩者聯(lián)合作用能夠提高p-AKT/AKT的比值；
　　3.25mM酒精作

8、用24h使得ADH和CYP2E1的蛋白表達增加（P<0.01），白藜蘆醇干預后具有明顯的改善作用（P<0.05），此外，酒精對ALDH的蛋白表達無明顯影響，但是白藜蘆醇干預后能有效提高ALDH的蛋白表達（P<0.05）；
　　4.白藜蘆醇能有效激活SIRT1的蛋白表達，顯著改善酒精引起的SIRT1蛋白表達降低（P<0.05）。
　　結論：白藜蘆醇對酒精引起的肝細胞中胰島素抵抗狀態(tài)具有一定的改善作用，且其改善作用可能是通過改善