補肺益腎方對大鼠骨髓樹突狀細胞的成熟分化及其炎癥因子表達的影響.pdf

1、目的：
　　觀察補肺益腎方對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的樹突狀細胞（dendritic cells，DCs）的成熟分化及其炎癥因子表達的影響，探討補肺益腎方調(diào)節(jié)DCs治療慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）的作用機制。
　　方法:
　　1、大鼠骨髓來源DCs的體外培養(yǎng)：無菌分離SPF級SD大鼠股骨、脛骨，制備大鼠股骨、脛

2、骨骨髓細胞懸液。經(jīng)Tris-NH4Cl裂解紅細胞后得到大鼠骨髓單個核細胞，加入大鼠重組粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、大鼠重組白細胞介素-4(IL-4)、全RPMI1640培養(yǎng)基，通過手法篩選DCs集落，體外培養(yǎng)8 d，收集第8 d疏松貼壁及懸浮細胞，為大鼠骨髓源DCs。將DCs分為空白組，補肺益腎組，地塞米松組，LPS組，LPS+補肺益腎組和LPS+地塞米松組。
　　2、 DCs形態(tài)學(xué)觀察：經(jīng)倒置顯微鏡觀察各組細胞

3、的成長情況及形態(tài)變化。
　　3、 DCs表型及吞噬功能測定：采用流式細胞術(shù)檢測細胞表型 OX-62、MHC-II、CD80、CD86及細胞吞噬功能FITC的變化。
　　4、 DCs細胞因子分泌水平測定：采用 Elisa法檢測細胞培養(yǎng)上清液中，細胞因子IL-6、IL-10、IL-12P40、IL-12P70、TNF-α、IFN-γ的變化。
　　5、 DCs基因表達水平測定：采用PCR熒光定量技術(shù)，檢測DCs中TLR4和T

4、LR2基因表達水平。
　　結(jié)果：
　　1、成功建立大鼠骨髓來源 DCs的體外培養(yǎng)方法。每1×107個大鼠的骨髓細胞可收獲約1×106個DCs，細胞純度可達到50％以上，并具有典型的DCs形態(tài)。
　　2、與空白組相比，地塞米松組和補肺益腎組 OX-62、MHC-II、CD80和CD86表達降低（P<0.01）；補肺益腎組較地塞米松組有所降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；LPS組OX-62、MHC-II、CD80和

5、CD86表達較空白組升高（P<0.01）；與 LPS組相比，LPS+地塞米松組和LPS+補肺益腎組均可顯著降低 OX-62、MHC- II、CD80和CD86的表達水平（P<0.01）；且 LPS+補肺益腎組較 LPS+地塞米松組降低更明顯（P<0.05或P<0.01）。
　　3、與空白組相比，地塞米松組和補肺益腎組 DCs吞噬功能均增強（P<0.01）；且補肺益腎組較地塞米松組增強明顯（P<0.05）；LPS組表達吞噬功能較空白

6、組明顯降低（P<0.01）；與 LPS組比較，LPS+地塞米松組和LPS+補肺益腎組吞噬功能均明顯增強（P<0.05）；且 LPS+補肺益腎組較 LPS+地塞米松組增強更明顯（P<0.05）。
　　4、與空白組相比，地塞米松組和補肺益腎組 IL-6、IL-10的分泌水平顯著升高（P<0.01），TNF-α、IFN-γ、IL-12P40、IL-12P70分泌水平降低（P<0.01）；但兩組間無顯著差異（P＞0.05）；LPS組DCs

7、分泌IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-12P40、IL-12P70較空白組明顯升高（P<0.01），IL-10降低（P<0.01）；與LPS組相比，LPS+地塞米松組和LPS+補肺益腎組，IL-6、IL-10表達升高（P<0.05或P<0.01），TNF-α、IFN-γ、IL-12P40、IL-12P70表達明顯降低（P<0.05或P<0.01）；且LPS+補肺益腎組變化尤為顯著（P<0.05或P<0.01）。
　　5、與空

8、白組比較，地塞米松組和補肺益腎組 DCs的TLR2、TLR4基因表達水平顯著升高（P<0.01）；但兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；LPS組細胞表達低水平TLR2、TLR4，較空白組明顯降低（P<0.01）；與LPS組相比，LPS+地塞米松組和LPS+補肺益腎組TLR2、TLR4基因表達水平明顯升高（P<0.01）；且LPS+補肺益腎組較LPS+地塞米松組升高顯著（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、補肺益腎方