葉黃素對(duì)人胃癌及乳腺癌細(xì)胞增殖抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：目前,天然植物化學(xué)物的生物學(xué)效應(yīng)研究已成為功能食品行業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱門,人們?cè)噲D從各種植物中尋找生物活性物質(zhì),來緩解并解決各種疾病問題。葉黃素是一種廣泛存在于蔬菜、花卉、水果及某些藻類生物中的類胡蘿卜素,具有毒性小、來源廣等優(yōu)點(diǎn)。隨著人們對(duì)葉黃素物理化學(xué)性質(zhì)和生物活性研究的深入,葉黃素已越來越引起醫(yī)藥研究者的重視。國(guó)外大量的流行病學(xué)證據(jù)表明,葉黃素在預(yù)防視黃斑退化、阻斷腫瘤、心血管疾病的發(fā)生與發(fā)展和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等方面都

2、有著廣泛的生物學(xué)活性。但對(duì)人胃癌及乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用的系統(tǒng)研究尚未見報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)旨在研究葉黃素對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901及乳腺癌細(xì)胞MCF-7增值抑制作用并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：葉黃素對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖的抑制作用研究:用MTT法檢測(cè)不同濃度葉黃素對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖的抑制作用;倒置顯微鏡觀察藥物作用后SGC-7901細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞的凋亡

3、及其細(xì)胞周期的阻滯情況;采用紫外分光光度法檢測(cè)SGC-7901 caspase-3活性。葉黃素對(duì)人胃癌細(xì)胞MCF-7增殖的抑制作用:臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)葉黃素對(duì)MCF-7增殖的影響;倒置顯微鏡觀察藥物作用后MCF-7細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變:彗星試驗(yàn)檢測(cè)葉黃素作用后MCF-7細(xì)胞DNA損傷情況;細(xì)胞凋亡DNA-ladder法檢測(cè)葉黃素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡;紫外分光光度法檢測(cè)MCF-7 caspase-3活性。
　　結(jié)果：MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,

4、葉黃素處理SGC-7901,能夠抑制細(xì)胞的增殖,并呈現(xiàn)一定的劑量和時(shí)間依賴性,其中80、60mg/L葉黃素作用96h后細(xì)胞增殖率分別下降至62.73±4.12％和53.61±1.98％。細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果顯示,葉黃素組與DMSO對(duì)照組比較SGC-7901細(xì)胞密度下降,部分細(xì)胞體積縮小,胞漿胞核濃縮,多數(shù)細(xì)胞變性,隨時(shí)間的增長(zhǎng),細(xì)胞毒性改變?cè)矫黠@。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,葉黃素誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng),16

5、0mg/L葉黃素作用于SGC-7901細(xì)胞48h后,早期凋亡率為16.95％,凋亡率為8.72％:作用72h后,早期凋亡率為4.93％,凋亡率增至36.90％。從細(xì)胞周期各時(shí)相分布來看,經(jīng)葉黃素作用SGC-7901后,G0/G1期細(xì)胞比例明顯減少,而S期細(xì)胞比例明顯增多,G2/M期細(xì)胞分布比例變化不明顯。紫外分光光度法檢測(cè)caspase-3活性,葉黃素能夠提高SGC-7901 caspase-3活性,18h時(shí)達(dá)到峰值,48h后仍高于對(duì)應(yīng)

6、的對(duì)照組細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)據(jù)染試驗(yàn)結(jié)果顯示,葉黃素能夠抑制MCF-7增殖,其抑制作用呈一定的時(shí)間和劑量依賴性。細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果同SGC-7901。葉黃素作用48h后單細(xì)胞電泳顯示,葉黃素組細(xì)胞呈現(xiàn)彗星狀電泳圖,說明葉黃素可造成MCF-7 DNA損傷。細(xì)胞凋亡DNA-ladder結(jié)果顯示,葉黃素作用MCF-730h后,提取DNA電泳,呈現(xiàn)梯狀條帶,說明葉黃素可誘導(dǎo)MCF-7凋亡。紫外分光光度法檢測(cè)caspase-3活性,顯示葉黃素可提高M(jìn)CF-