UL-16結(jié)合蛋白(ULBP3)的表達(dá)及對(duì)癌癥病人NK細(xì)胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:
　　人類巨細(xì)胞病毒糖蛋白UL-16結(jié)合蛋白-3(ULBP3)是最近發(fā)現(xiàn)的NK細(xì)胞表面重要活化性受體NKG2D的配體，在受多種病毒感染后的組織細(xì)胞或惡性腫瘤細(xì)胞表面都可表達(dá)上調(diào)，是一種重要的壓力誘導(dǎo)蛋白。本課題旨在研究ULBP3在腫瘤中的表達(dá)以及對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:
　　1.ULBP3在腫瘤中的表達(dá):采用流式檢測(cè)腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞株膜表面ULBP3的表達(dá);采用時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)游離型U

2、LBP3(sULBP3)在腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)上清和腫瘤病人血清中的含量;采用免疫組化檢測(cè)腫瘤病人組織中ULBP3的表達(dá);采用PCR方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞株和腫瘤組織中ULBP3基因的含量。
　　2.NK細(xì)胞毒性檢測(cè)試驗(yàn):采用LDH釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度sULBP3蛋白(ULBP3-Fc)和不同表達(dá)量的膜型ULBP3分別處理對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性的影響，以及ULBP3單克隆抗體對(duì)其調(diào)節(jié)作用。
　　3.流式檢測(cè)不同濃度sULBP3處理后對(duì)NK細(xì)

3、胞表面表達(dá)NKG2D的影響。
　　4.流式檢測(cè)腫瘤組織浸潤(rùn)NK細(xì)胞數(shù)量與ULBP3表達(dá)的相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.ULBP3不同程度的表達(dá)在結(jié)腸癌細(xì)胞株CD133-SW620和CD133+SW620以及肝癌細(xì)胞株7721細(xì)胞膜表面，而不表達(dá)在食管癌ECA109、肺癌A549、紅白血病K562細(xì)胞株細(xì)胞膜表面;并且在腸癌、肝癌、肺癌和胃癌組織中ULBP3表達(dá)明顯高于癌旁組織。sULBP3普遍存在于胃癌、腸癌、肺癌病

4、人血清中，明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.001);sULBP存在于結(jié)腸癌細(xì)胞株CD133-SW620、CD133+SW620、肝癌細(xì)胞株7721培養(yǎng)上清液中，但不存在于肺癌A549、紅白血病K562、食管癌ECA109細(xì)胞株以及靜息和活化的NK細(xì)胞培養(yǎng)上清中。ULBP3 mRNA表達(dá)于CD133-SW620、CD133+SW620、7721細(xì)胞株和結(jié)腸癌組織中，而在K562、A549、ECA109和癌旁組織中均不表達(dá)。
　　2.膜型

5、ULBP3通過(guò)NKG2D途徑介導(dǎo)了NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的識(shí)別和殺傷作用，并且NK細(xì)胞的殺傷活性隨腫瘤細(xì)胞表面ULBP3表達(dá)量的增多而增強(qiáng)。
　　3.低濃度sULBP3（＜15ng/ml）通過(guò)下調(diào)NKG2D的表達(dá)可以降低NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，而高濃度的sULBP3(＞15ng/ml)對(duì)NK細(xì)胞的殺傷活性沒(méi)有影響。
　　4.腫瘤組織中NK細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量與ULBP3的表達(dá)量成負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　5.ULBP3單克隆抗體通過(guò)