14-3-3β蛋白介導肝臟GCGR對糖異生的調節(jié)作用.pdf

1、目的：
　　胰高血糖素（Glucagon,GLN）與肝臟胰高血糖素受體（Glucagon receptor,GCGR）結合后，參與調節(jié)機體糖脂代謝作用。研究發(fā)現(xiàn)14-3-3β蛋白(YWHAB)是GCGR的相關輔助蛋白。目前關于肝臟脂肪變后這兩種蛋白表達變化情況以及兩者結合后對肝臟糖代謝的具體調節(jié)作用還不是很明確。本研究旨在觀察GCGR和YWHAB在肝臟脂肪變后的表達水平變化以及YWHAB介導GCGR對肝臟糖異生的調節(jié)作用。

2、　　方法：
　　應用QPCR、Western Blot檢測HepG2細胞株、小鼠多種組織、HepG2細胞脂肪變后和ob/ob小鼠肝組織的gcgr和ywhab mRNA、蛋白的表達情況。免疫組化技術（immunocytochemistry）檢測ob/ob小鼠和對照小鼠肝組織中兩者表達及定位情況。免疫共沉淀法檢測YWHAB和GCGR在HepG2細胞中結合情況。過表達及沉默YWHAB后，在有和無胰高血糖素刺激下，用QPCR、Wester

3、n Blot檢測糖異生主要關鍵酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase，G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase，PEPCK）mRNA和蛋白表達水平變化。
　　結果:
　　1. GCGR和YWHAB在肝組織和HepG2細胞均有表達；免疫組化結果顯示：GCGR在細胞膜上表達，YWHAB在細胞質和細胞核中表達。
　　2.在mRNA和蛋

4、白水平上，ob/ob小鼠肝組織及油酸誘導HepG2細胞脂肪變中GCGR和YWHAB的表達量均比對照組有所降低。
　　3. YWHAB和GCGR在HepG2細胞中結合后，在胰高血糖素的刺激下，YWHAB過表達組中的G6Pase、PEPCK mRNA、蛋白的表達顯著下降；YWHAB沉默表達組中G6Pase、PEPCK表達量增加。
　　總結:
　　GCGR和YWHAB在肝臟和HepG2細胞中均有表達。肝臟發(fā)生脂肪變后，兩者表