冷凍干燥保存法對人精子形態(tài)結構及DNA的影響研究.pdf

1、目的: 探討冷凍干燥法對人精子形態(tài)結構和DNA的影響，及海藻糖和蛋黃在人精子冷凍干燥保存的保護作用。 方法: 按WHO關于精液判斷標準取健康志愿者合格精液48份，其中40份隨機分為4組，其中3組分別加入不同的凍干保護劑：ETBS(Tris-HCl緩沖液中加入螯合齊IEDTA或EGTA)、ETBS+海藻糖、ETBS+海藻糖+蛋黃；分成凍干A組、凍干B組、凍干C組，給予冷凍干燥處理。1組作為新鮮精液對照組。另外8份精液標本用H202

2、處理后直接進行TUNEL實驗和彗星實驗做為陽性對照組。凍干處理后的3組精子在4℃冰箱中保存3周后取出。對凍干保存后的3組精子標本和新鮮精子標本分別行低滲膨脹實驗和電鏡形態(tài)觀測，并用原位缺口末端標記(TUNEL)法和彗星試驗進行DNA斷裂精子百分率檢測。 結果: ①在低膨脹實驗中，ETBS組膨脹率為4％，ETBS+海藻糖組為12％，ETBS+海藻糖+蛋黃組為36％。新鮮對照組精子為96％。 ②電鏡觀察見精子外部形態(tài)的完整性

3、上以ETBS+海藻糖+蛋黃組為最佳，ET'S+海藻糖組次之，ETBS組最差。 ③ETBS、ETBS+海藻糖組、ETBS+海藻糖+蛋黃組和新鮮精子組DNA斷裂精子百分率以TUEL法檢測，分別為(6.39±1.46)％、(5.75±1.29)％、(.5.20±1.38)％、(4.94±1.86)％；以彗星試驗檢測，分別為(6.4.8±1.58)％、(5.83±1.48)％、(5.28士1.42)％、(5.12±1.65)％。冷凍干燥

4、保存后的各組與新鮮精液相比較，DNA斷裂精子百分率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論: ①在ETBS的基礎上加入海藻糖能顯著減小凍干精子膜和尾部破損比例，將海藻糖和蛋黃結合使用時能更好的避免凍干后精子形態(tài)的破壞. ②以ETBS或ETBS加海藻糖、蛋黃為保護劑的冷凍干燥法對人精子DNA無明顯損傷，可有效的保護人精子的DNA。 ③用海藻糖和蛋黃修正的ETBS保護劑能更好的防止精子結構在凍干過程中產(chǎn)生損傷，比單