魚(yú)類(lèi)精子膜脂及膽固醇轉(zhuǎn)入對(duì)冷凍保存影響的研究.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文魚(yú)類(lèi)精子膜脂及膽固醇轉(zhuǎn)入對(duì)冷凍保存影響的研究姓名：呂剛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：中藥學(xué)指導(dǎo)教師：黃長(zhǎng)江201105溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，這幾種魚(yú)精子在冷凍后活力大幅降低，PC、PE、SM及CHO四種脂質(zhì)也有顯著性減少，并且每種魚(yú)每種脂質(zhì)減少的幅度也不同。質(zhì)膜中膽固醇的增減與斑馬魚(yú)精子低溫冷凍的關(guān)系。首先，實(shí)驗(yàn)以環(huán)糊精(CD)為載體，其與膽固醇一起處理后得到混合體稱(chēng)之為CLC，CLC與精子一起在室溫下孵育

2、可將膽固醇轉(zhuǎn)入到精子質(zhì)膜中。實(shí)驗(yàn)中分別用100p1濃度是15、3、5、7、10mg／ml的CLC處理107個(gè)精子后再低溫冷凍，結(jié)果表明5mg／mlCLC處理組凍后活力最高。接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)全部用5mg／mlCLC處理樣品。檢測(cè)處理組和對(duì)照組精子PC、PE、SM及CHO四種脂質(zhì)的含量，結(jié)果顯示處理組和對(duì)照組CHO的含量分別為4699／108sperm和14—108sperm，而PC、PE和SM含量相近。在活力實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)凍后精子處理組活力大多數(shù)

3、能維持120s，而空白對(duì)照組僅能維持60s，并且處理組50％60％的活力也要高于對(duì)照組的30％40％。通過(guò)SY14／PI雙染色實(shí)驗(yàn)，結(jié)果處理組的質(zhì)膜完整性能達(dá)到70％，而對(duì)照組只有40％50％。線粒體膜電位實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示處理組與對(duì)照組的線粒體膜電位沒(méi)有顯著性差別。在人工受精實(shí)驗(yàn)中，處理組和對(duì)照組的受精率和孵化率都明顯低于鮮精組，而處理組的受精率和孵化率比對(duì)照組略高但沒(méi)有顯著性差異?？傊?，CLC確實(shí)提高了精子中膽固醇含量、凍后精子活力和凍后

4、精子質(zhì)膜完整率，但在線粒體膜電位和受精率上作用不明顯，總體來(lái)說(shuō)膽固醇增多是對(duì)斑馬魚(yú)精子低溫冷凍有利的。其次，直接用環(huán)糊精與斑馬魚(yú)精子一起孵育減少其膽固醇含量。同樣檢測(cè)處理組和對(duì)照組精子PC、PE、SM及CHO四種脂質(zhì)的含量，結(jié)果顯示處理組和對(duì)照組CHO的含量分別為98pg／108sperm和1491上g／108sperm，而PC、PE和SM也沒(méi)差別。在活力實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)凍后精子處理組活力大多數(shù)僅能維持30s40s，而空白對(duì)照組能維持60s，