竹節(jié)參總皂苷對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的:本課題擬在建立急性酒精性肝損傷小鼠模型的基礎(chǔ)上,研究竹節(jié)參總皂苷對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用,運(yùn)用分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù),探討竹節(jié)參總皂苷對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法:將SPF級(jí)雄性Balb/c小鼠,6-8Week,20±2g,隨機(jī)分為正常對(duì)照組,模型組,竹節(jié)參總皂苷高劑量組,竹節(jié)參總皂苷低劑量組。TSPJ高低劑量組分別給予相應(yīng)劑量的TSPJ,每天兩次,連續(xù)3天;其余組給予13ml/kg的NS;末次給藥后,除正常對(duì)

2、照組繼續(xù)給予NS外,其余組均給予13ml/kg的白酒(56度)灌胃,次/12h,連續(xù)3次。其中給予的酒精的量(g)=飲酒量(ml)×酒精含量(％)×0.8。⑴檢測(cè)各組小鼠肝功能、甘油三酯以及肝臟指數(shù),并做小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察;⑵流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肝臟枯否氏細(xì)胞(kuffer)中TLR4+CD14+的表達(dá)情況;ELISA檢測(cè)小鼠血清中LPS含量變化;⑶檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活力,MDA含量以及小鼠肝臟組織中SOD、G

3、SH-Px mRNA的表達(dá),檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量變化及小鼠肝臟組織中TNF-α、IL-4、IFN-γmRNA的表達(dá)情況。⑷WESTERN BLOT檢測(cè)肝組織核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB P65的表達(dá)。
　　結(jié)果:⑴模型組小鼠肝功能、甘油三酯和肝臟指數(shù)均較正常對(duì)照組顯著上升,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。竹節(jié)參總皂苷高、低劑量組小鼠肝功能、甘油三酯和肝臟指數(shù)較模型組均小鼠均顯著

4、降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。與正常對(duì)照組相比較,模型組小鼠肝臟脂肪變性指數(shù)明顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05),與模型組相比較,竹節(jié)參總皂苷高、低劑量組脂肪變性指數(shù)均明顯下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。⑵模型組小鼠血清中LPS含量較正常對(duì)照組小鼠明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05),竹節(jié)參總皂苷高低劑量組小鼠血清中LPS含量較模型組小鼠明顯降低,與模型組相比

5、,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。模型組小鼠肝臟kuffer細(xì)胞TLR4分子表達(dá)較正常對(duì)照組小鼠明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。竹節(jié)參總皂苷高低劑量組小鼠肝臟組織中kuffer細(xì)胞TLR4的表達(dá)較模型組小鼠明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。⑶模型組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活力較正常對(duì)照組小鼠顯著降低,MDA含量顯著上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05),竹

6、節(jié)參高、低劑量組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活力較模型組小鼠顯著升高, MDA含量顯著下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05);模型組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px mRNA的表達(dá)較正常對(duì)照組小鼠均降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05),竹節(jié)參高、低劑量組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px mRNA的表達(dá)較模型組小鼠均上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。模型組小鼠肝臟組織中TNF-α、IL

7、-4、IFN-γ含量較正常對(duì)照組小鼠均顯著上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。竹節(jié)參高、低劑量組小鼠肝臟組織中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量較模型組小鼠均顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。模型組小鼠肝臟組織中TNF-α、IL-4、IFN-γmRNA的表達(dá)較正常對(duì)照組小鼠均顯著上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或 P﹤0.05)。竹節(jié)參高、低劑量組小鼠肝臟組織中TNF-α、IL-4、IFN-γm

8、RNA的表達(dá)較模型組小鼠均顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01或P﹤0.05)。(4)模型組小鼠肝臟組織中NF-κBp65蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增加,竹節(jié)參高、低劑量組小鼠組織中NF-κBp65蛋白表達(dá)較模型組明顯降低。
　　結(jié)論:⑴竹節(jié)參總皂苷可以顯著改善急性酒精性肝損傷小鼠的肝功能,降低甘油三酯含量以及肝臟指數(shù),具有較好的護(hù)肝作用。⑵竹節(jié)參總皂苷可以通過(guò)抑制TLR4的表達(dá)而抑制肝臟巨噬細(xì)胞的激活,從而發(fā)揮抗炎作用進(jìn)而發(fā)揮對(duì)