COX-2在食管上皮癌變中的作用及戊地昔布抗食管癌的機(jī)制研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文COX2在食管上皮癌變中的作用及戊地昔布抗食管癌的機(jī)制研究姓名：張玉軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：左連富齊鳳英20060401中文摘要師分別進(jìn)行組織病理學(xué)診斷。采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)COX一2蛋白的表達(dá)。70％乙醇固定的標(biāo)本，采用流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry，F(xiàn)CM)定量檢測(cè)COX一2蛋白表達(dá)。2戊地昔布抑制人食管癌Ecal09細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人食管癌Ecal

2、09細(xì)胞，用259L‘1胰蛋白酶消化，按1104個(gè)孔。接種于96孔板、6孔板和100mL的培養(yǎng)瓶中，待細(xì)胞貼壁6h后，輕輕吸去上清，加入濃度為400、200、100、50、25Ⅱm01L。的戊地昔布。同時(shí)設(shè)不含藥物的陰性對(duì)照和等體積DMS0的溶劑對(duì)照組，DMS0體積分?jǐn)?shù)為016％。于培養(yǎng)24、48和72h后，采用MTT法檢測(cè)戊地昔布對(duì)Ecal09細(xì)胞的抑制作用，F(xiàn)CM法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率。采用透射電鏡及DNALadder進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)胞的凋

3、亡。LDH試劑盒檢測(cè)Ecal09細(xì)胞上清中LDH的含量：采用RTPCR檢測(cè)戊地昔布對(duì)食管癌細(xì)胞D38和Cox2mRNA的表達(dá)變化；免疫細(xì)胞化學(xué)及FCM檢測(cè)戊地昔布對(duì)食管癌細(xì)胞pp38、COX2及凋亡基因c—fos、cjun、Fas、FasL蛋白表達(dá)的影響。3p38MAPK特異性抑制劑SB203580對(duì)食管癌細(xì)胞凋亡及p38表達(dá)的影響將常規(guī)培養(yǎng)的食管癌Ecal09細(xì)胞分為對(duì)照組、400、200、100、50、25um01L’1的戊地昔布組

4、、各濃度戊地昔布SB203580(10um01L。1)組，繼續(xù)培養(yǎng)72h。FCM法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率、RTPCR檢測(cè)p38mRNA的表達(dá)變化、FCM法檢測(cè)sB203580對(duì)戊地昔布誘導(dǎo)的Ecal09細(xì)胞p_p38蛋白表達(dá)的影響。4戊地昔布對(duì)裸鼠食管癌移植瘤的抑制作用取BALB／C裸鼠12只，分別在裸鼠的左前和右后腋皮下按2106個(gè)細(xì)胞每個(gè)部位。接種人食管癌Ecal09細(xì)胞。隨機(jī)分為對(duì)照組6只(只給同等劑量的05％羧甲基纖維素鈉1和戊地昔布