線粒體保護(hù)作用可能是人參皂苷Rg1延緩細(xì)胞復(fù)制衰老的關(guān)鍵環(huán)節(jié).pdf

1、目的：用t-BHP(三丁基過氧化氫，tert-butylhydroperoxide)誘導(dǎo)WI-38細(xì)胞衰老，建立體外細(xì)胞衰老的模型，并研究人參皂苷Rg1(ginsenosideRg1)對t-BHP誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老的保護(hù)作用及可能的線粒體調(diào)控機(jī)制。 方法：用t-BHP100μmol/L作用WI-38細(xì)胞，從第30代的培養(yǎng)細(xì)胞開始，隔代作用1次，每次1h，共4次，誘導(dǎo)細(xì)胞衰老。從光鏡、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的變化；流式細(xì)胞術(shù)分

2、析細(xì)胞周期，計算G1期細(xì)胞的比例；SAβ-半乳糖苷酶的細(xì)胞化學(xué)染色，確定成功建立體外細(xì)胞衰老的模型。然后，將WI-38細(xì)胞隨機(jī)分成4組，用不同劑量的人參皂苷Rg1處理模型細(xì)胞，比較不同劑量的Rg1對模型細(xì)胞中衰老指征的影響，并探討對細(xì)胞內(nèi)ATP、線粒體膜電位的變化有無改善作用，同時通過測定線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ～Ⅳ的活性變化以探討Rg1延緩衰老的可能分子機(jī)制。 結(jié)果：100μmol/Lt-BHP作用4次后，WI-38細(xì)胞出現(xiàn)衰老的

3、特征，細(xì)胞增殖分裂停止，細(xì)胞體積增大、胞體變平、次級溶酶體增多，線粒體腫脹，同時G1期細(xì)胞比例增加，β-半乳糖苷酶染色陽性細(xì)胞數(shù)增加，提示t-BHP能有效地誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，可用于建立體外細(xì)胞衰老模型，而10μmol/L人參皂苷Rg1能明顯地對抗WI-38細(xì)胞的這種改變，具有肯定的抗衰老作用。同時研究證實經(jīng)t-BHP作用后，WI-38細(xì)胞中的線粒體膜電位有下降趨勢，ATP產(chǎn)量減少，呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ的活性降低，提示t-BHP可能通過對呼吸鏈復(fù)合

4、物Ⅳ的氧化損傷作用誘導(dǎo)細(xì)胞衰老；而經(jīng)不同濃度人參皂苷Rg1處理后線粒體膜電位有提高趨勢，ATP水平和呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ的活性則顯著增高，尤其以10μmol/L人參皂苷Rg1的改善作用最為明顯。提示人參皂苷Rg1可能主要通過提高線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ的活性來提高ATP產(chǎn)量，從而對抗t-BHP誘導(dǎo)的線粒體損害，發(fā)揮延緩t-BHP誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老作用。 結(jié)論： 1、t-BHP誘導(dǎo)WI-38細(xì)胞，成功地建立了體外細(xì)胞衰老模型。人參皂苷R

5、g1能有效對抗t-BHP誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老，有較好的抗衰老作用，以10μmol/L人參皂苷Rg1抗t-BHP誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老作用最為明顯。 2、t-BHP可能通過對線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ的氧化損傷作用誘導(dǎo)細(xì)胞衰老。不同濃度的人參皂苷Rg1處理后能夠不同程度地提高細(xì)胞ATP水平和呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ的活性，尤其以10μmol/L人參皂苷Rg1的改善作用最為明顯。提示人參皂苷Rg1可能主要通過提高線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ的活性來提高ATP產(chǎn)量，從而對