三七總皂苷對大鼠阿霉素腎病結(jié)締組織生長因子表達調(diào)控的實驗研究.pdf

1、腎纖維化是多種原因引起腎臟損傷后的共同轉(zhuǎn)歸，是慢性腎衰竭的主要病理學基礎(chǔ)。阿霉素所致的腎纖維化動物模型具有慢性進行性腎損害的特點，與人類進行性腎臟疾病的表現(xiàn)非常類似。三七總皂苷(Panax notoginseng saponins，PNS)是五加科人參屬植物三七的主要有效活性成分，其塊根中含皂苷約12％，其中主要成分與人參一致，即人參二醇型皂苷Rb1、人參三醇型皂苷Rg1，總含量較人參高。它具有擴張血管，抑制血小板聚集，延長凝血時間，降

2、血脂，清除自由基，抗炎，抗氧化等藥理作用。中醫(yī)理論認為，腎纖維化等結(jié)締組織增生性疾病與血瘀證相關(guān)?；钛鏊幬飳Υ祟惣膊∮歇毺毓π?，三七補血而不留瘀，化瘀而不傷血的功效又契合祛邪扶正的中醫(yī)治療原則。研究認為，在腎纖維化發(fā)生發(fā)展過程中，有多種生長因子發(fā)揮重要作用。結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)作為轉(zhuǎn)化生長因子-β的下游因子，要通過介導(dǎo)細胞增殖、促進細胞外基質(zhì)合成等作用，在腎纖維

3、化中扮演重要角色。所以，研究三七總皂苷對CTGF異常表達的抑制作用對闡釋其防治大鼠阿霉素腎病的作用機制具有重要意義。 目的：本研究旨在觀察三七總皂苷對阿霉素腎病大鼠生理生化指標、腎臟病理變化以及腎組織CTGFmRNA及其蛋白表達的影響。觀察三七總皂苷對體外培養(yǎng)的腎小球系膜細胞在脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)刺激下引起的細胞增殖和CTGFmRNA及其蛋白表達的影響。從整體、組織、細胞、蛋白質(zhì)和基因水平探討三

4、七總皂苷延緩腎纖維化的作用機制，為進一步研究其防治腎纖維化的作用機理提供實驗依據(jù)。 方法：整體實驗，采用單側(cè)腎切除合并阿霉素腹腔注射造大鼠阿霉素腎病模型。將大鼠分為正常組、假手術(shù)組、模型組、苯那普利組和三七總皂苷組，并檢測下列指標。 1．每周檢測大鼠體重，隔周進行尿蛋白定量檢測，于實驗第10周處死大鼠，分離血清，測定其中BUN、Scr、Cho、TG、TP、Alb的含量，腎組織做HE染色、六胺銀染色、Mallory染色和M

5、asson染色觀察腎組織病理形態(tài)學變化； 2．采用原位雜交法檢測各組大鼠腎組織內(nèi)CTGFmRNA的表達； 3．采用免疫組織化學法檢測各組大鼠腎組織內(nèi)CTGF蛋白的表達。 細胞實驗，采用腎小球系膜細胞體外培養(yǎng)。將細胞分為空白組、LPS組、苯那普利組、三七總皂苷組。除空白組外，其余各組均用LPS刺激，檢測下列指標。 1．用MTT法檢測三七總皂苷對LPS刺激腎小球系膜細胞在12h，24h，48h和60h增殖的影

6、響； 2．采用RT-PCR法檢測LPS誘導(dǎo)腎小球系膜細胞CTGFmRNA的表達情況和三七總皂苷對該指標的影響； 3．采用細胞爬片免疫組化法和Western-blot法檢測LPS誘導(dǎo)腎小球系膜細胞CTGF蛋白的表達情況和三七總皂苷及Rg1、Rb1對該指標的影響。 結(jié)果 1．三七總皂苷組大鼠體重明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)，三七總皂苷可以減少阿霉素腎病大鼠尿蛋白排泄(與模型組相比P<0.05)

7、，降低血肌酐和尿素氮，降低血漿膽固醇和甘油三脂，升高血漿總蛋白和白蛋白(與模型組相比P<0.05)，從而改善腎功能，糾正脂質(zhì)代謝紊亂，減輕腎臟的病理損傷(腎小球硬化指數(shù)和腎間質(zhì)病變評分結(jié)果與模型組相比P<0.01)； 2．三七總皂苷組各個時間點LPS刺激引起的腎小球系膜細胞增殖情況顯著低于LPS組(P<0.05)，該作用與苯那普利組相比無顯著差異； 3．三七總皂苷組阿霉素腎病大鼠腎組織CTGFmRNA的表達顯著降低(與模

8、型組相比P<0.05)，并且，CTGF蛋白表達明顯降低(與模型組相比P<0.01)與苯那普利組相比無顯著差異； 4．三七總皂苷組LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細胞內(nèi)CTGFmRNA的表達明顯降低(與LPS組相比P<0.01)； 5．三七總皂苷及Rg1、Rb1大小劑量組LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細胞內(nèi)CTGF蛋白的表達與LPS組相比也明顯降低(P<0.05)，上述指標與苯那普利組相比均無顯著差異。 結(jié)論 1．三七總皂苷