重組白蛋白（rHSA）純化工藝優(yōu)化研究.pdf

1、白蛋白臨床使用多年，對多種疾病有確切的療效，目前因血液污染日益嚴重，從DNA技術開發(fā)一種安全可靠的替代產(chǎn)品有極為重要的意義。采用基因重組技術生產(chǎn)的白蛋白，內(nèi)含的雜質組分與血源白蛋白中完全不同，由于其臨床用藥高達幾十克，是生物技術領域唯一的克級用藥產(chǎn)品，因此對產(chǎn)品純度有著極為嚴格的要求，尤其是源于宿主菌的雜質成分，因此控制異源雜質含量成為課題開發(fā)的重點。 本文通過大量介質篩選，選擇了一種新型陽離子和一種新型陰離子介質替代傳統(tǒng)的分離

2、介質，通過工藝研究開發(fā)了一條新型高鹽陽離子捕獲為特色的純化工藝，發(fā)酵上清無需稀釋可直接上柱純化，縮短了工藝周期。新型高鹽陽離子特殊的配基結構使其具有更強的選擇性。經(jīng)過研究確定的純化工藝路線：對發(fā)酵上清液進行加熱滅活蛋白酶一樹脂脫色一陽離子捕獲一疏水純化一ConA親和層析一陰離子層析…濃縮一無菌分裝。并用此工藝制備了產(chǎn)品。建立了色素雜質、宿主蛋白和宿主殘?zhí)恰堄郉NA等各項異源雜質的分析檢測方法，對純化過程中異源雜質的去除進行了詳細的分析

3、。分析結果顯示，經(jīng)過純化后重組白蛋白終產(chǎn)品外觀呈淡黃色，色素雜質(以A350/A280表示)低于0.010，宿主蛋白含量低于0.1ppm，殘余DNA含量每劑量(10g)低于100ng(靈敏線之下)，不含有引起抗原反應的甘露多糖。產(chǎn)品質量比原工藝有大幅度提高。 本文以血源白蛋白(pHSA)作為對照，對產(chǎn)品進行了分析鑒定。結果顯示，rHSA對HSA單抗具有免疫原性，等電點為4.7-4.9，：HPLC純度在99﹪以上，還原與非還原電泳