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1、5-羥甲基糠醛是食品中由還原糖經(jīng)酸催化降解或通過美拉德反應(yīng)而形成的一種物質(zhì)。至今為止,雖然5-羥甲基糠醛的毒性仍處于爭(zhēng)議過程中,但是它的含量經(jīng)常作為衡量碳水化合物含量豐富的食品在經(jīng)過熱處理或貯存時(shí)間長(zhǎng)時(shí)質(zhì)量破壞程度的一個(gè)指標(biāo)。所以食品中5-羥甲基糠醛的檢測(cè)方法仍然受到人們的普遍關(guān)注。為了便于分析檢測(cè)食品中的5-羥甲基糠醛,本文建立了一種具有高靈敏度和高特異性的酶聯(lián)免疫方法(ELISA)。
為了得到針對(duì)5-羥甲基糠醛有特異性的抗
2、體,本研究分別利用5-羥甲基糠醛與琥珀酸酐,一代樹狀分子,二代樹狀分子和對(duì)苯二甲酸反應(yīng)得到四種不同的半抗原,并與載體蛋白BSA和KLH結(jié)合制備了七種免疫原分別免疫新西蘭大白兔,然后選出對(duì)于5-羥甲基糠醛特異性最強(qiáng)的抗血清,用ProteinA-Sepharose4B蛋白親和柱純化后得到特異性的抗體。為了檢測(cè)實(shí)際樣品中5-羥甲基糠醛的含量,必須研究具有好的靈敏度和450nm波長(zhǎng)下合適吸光度值(最大吸光度值為1左右)的ELISA分析條件。經(jīng)過
3、優(yōu)化酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù),抗體包被量,緩沖溶液pH,離子強(qiáng)度及封閉液五項(xiàng)參數(shù),得到ELISA方法工作的最佳條件,并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。該方法的靈敏度(IC50)和檢出限(IC15)分別是0.15±0.012mg/L和0.02±0.002mg/L。
本研究通過對(duì)樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化,消除了樣品基質(zhì)影響,得到一套簡(jiǎn)單可行的樣品處理方法。并將建立的方法應(yīng)用于焙烤食品法式小面包,薯片,法式軟面包和麥香雞塊中5-羥甲基糠醛的檢測(cè),樣品檢出限是1-
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