南瓜糖肽和木葡聚糖的分離純化及其功能研究.pdf

1、南瓜是重要的藥食兩用植物，含有多種生理活性組分。文獻表明，南瓜及其提取物具有降血糖，降血壓，抗腫瘤，抗微生物，免疫調(diào)節(jié)，消炎鎮(zhèn)痛及驅(qū)蟲等功效。其中，廣泛的研究工作聚焦在南瓜的降血糖功能上，幾種降血糖南瓜多糖被提取并測定了其理化和功能性質(zhì)。但是，南瓜中糖肽的分離及性質(zhì)研究未見報道，南瓜經(jīng)水提取后的殘渣也未得到利用。 本論文首先從南瓜中分離純化了一個新的南瓜糖肽，測定了其理化性質(zhì)，優(yōu)化了其提取工藝；然后，又從經(jīng)水提取后的南瓜果渣中提

2、取了木葡聚糖，完成工藝優(yōu)化；最后，研究了南瓜中這兩個功能組分的降血糖活性。實驗結(jié)果如下： (1)采用緩凍預(yù)處理，熱水提取工藝制備南瓜粗多糖，運用響應(yīng)曲面研究了液料比(x1)、提取溫度(x2)和提取時間(x3)對南瓜水提多糖得率的影響，確定了熱水浸提的最佳工藝參數(shù)為：液料比為13.9：1，提取溫度為65.2℃，提取時間為7.8小時。運用R2，p水平和學(xué)生氏-t檢驗進行擬合度和顯著性檢驗，影響最顯著的是液料比的平方項(x1x1)，隨

3、后是提取時間(x3)和提取溫度的平方項(x2x2)。x1x1對應(yīng)的t值為-6.6075，p水平為0.0001，而x3和x2x2的t值分別為-4.1960和2.2503，p水平為0.0018和0.0482。按優(yōu)化工藝進行驗證實驗，多糖得率為6.7％，優(yōu)化工藝合理。 (2)運用DEAE-SepharoseFastFlow(20cm×2.6cm)離子交換層析從水提南瓜粗多糖中純化南瓜糖肽，并用HPLC測定其純度。純化條件為：100mg

4、多糖溶于7m10.05mMpH7.8磷酸緩沖液中，上柱，用120m10.05mMpH7.8磷酸緩沖液洗脫，然后用150ml0～0.5MNaCl緩沖液梯度洗脫，最后用120ml含0.5MNaCl緩沖液洗脫，流速1.2ml/min，自動部分收集4分鐘/管，得到糖肽峰PBPP1，PBPP2。用HPLC進行純度鑒定，PBPP2為均一糖肽。運用HPLC測定PBPP2的分子量為9.19*106Da，單糖組成和摩爾比為甘露糖：阿拉伯糖=1∶2。運用氨

5、基酸分析儀測定了組成PBPP2的18種氨基酸。 (3)南瓜水提后的殘渣用濃堿提取了木葡聚糖。運用響應(yīng)曲面方法研究了液料比(x1)、NaOH濃度(x2)和提取時間(x3)對南瓜木葡聚糖得率的影響，并優(yōu)化了木葡聚糖的提取工藝。運用R2，p水平和學(xué)生氏-t檢驗進行擬合度和顯著性檢驗，最顯著因素為x1x1,然后是x2x2和x2，其t，p值分別為-16.2435，0.00000002；-13.8831，0.00000007和-12.169

6、4，0.00000026。最佳提取工藝為：液料比20.1∶1；NaOH濃度2.7M；提取時間12.6小時。驗證實驗表明，優(yōu)化工藝合理。 (4)動物實驗研究南瓜糖肽PBPP2的降血糖功能。結(jié)果表明，連續(xù)10天灌胃給予南瓜糖肽PBPP2和木葡聚糖，大劑量(400mg/kgb.w.)南瓜糖肽PBPP2組血糖值(7.18±3.59)顯著(P＜0.01)低于模型組血糖值(11.89±3.70)，大劑量(400mg/kgb.w.)木葡聚糖組