牛乳蛋白質(zhì)檢測技術(shù)的研究.pdf

1、乳制品安全的核心問題是乳源蛋白質(zhì)的檢測。本課題研究比較了凱氏定氮法(Kjeldahl)和四種分光光度法對牛乳與其模擬摻假樣中蛋白質(zhì)的定量檢測，并應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法和高效毛細管電泳(HPCE)法對牛乳中的蛋白質(zhì)進行分離分析。
　　 牛乳蛋白含量的凱氏定氮法測定，以牛乳及摻入不同濃度的尿素及三聚氰胺為樣品，凱氏定氮法結(jié)合三氯乙酸沉淀確定牛乳蛋白質(zhì)的理論值，含不同量尿素樣品的蛋白測定值的誤差率

2、小于3.54％、相對標準偏差(RSD)小于1.93％，該類樣品中蛋白含量和理論值沒有顯著性差異，P值大于0.05；而摻入不同量三聚氰胺樣品中蛋白測定值和理論值存在顯著性差異，P值小于0.05，且隨著摻假比例的增高，誤差率不斷增大?？梢?，凱氏定氮法能準確檢測到牛乳與摻入尿素牛乳的蛋白量，但對摻入三聚氰胺牛乳的蛋白量難以準確檢測。
　　 牛乳蛋白含量的分光光度法測定，以凱氏定氮法測定的牛乳蛋白質(zhì)理論值為依據(jù)，應(yīng)用雙縮脲法(Biure

3、t)、福林酚法(Lowry)、考馬斯亮藍法(Bradford)和4，4＇-二羧基-2，2＇-聯(lián)喹啉法(BCA)，對摻假牛乳進行檢測，其中考馬斯亮藍法不能準確測定牛乳蛋白質(zhì)含量，在牛乳中摻入尿素和三聚氰胺的檢測中誤差率均大于21.56％和20.4％，且P值小于0.05。雙縮脲比色法，福林酚法和4，4＇-二羧基-2，2＇-聯(lián)喹啉法能準確檢測牛乳蛋白質(zhì)含量。這三種方法在檢測牛乳中摻入尿素和三聚氰胺的樣品時誤差率依次為：雙縮脲比色法小于2.99

4、％和1.55％、福林酚法小于2.99％和2.04％、4，4＇-二羧基-2，2＇-聯(lián)喹啉法小于3.13％和1.54％；且三種方法的P值大于0.05，實測值和理論值沒有顯著性差異。結(jié)果表明，除考馬斯亮藍法外，其它三種方法均能真實的測定出牛乳中摻入尿素和三聚氰胺時的蛋白含量。
　　 牛乳及摻假乳中蛋白質(zhì)的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析技術(shù)研究。確定分離膠濃度為12.5％、濃縮膠濃度為3％的不連續(xù)垂直穩(wěn)流電泳

5、，實驗可以得到較好的乳蛋白分離分析圖譜。對牛乳中摻入不同濃度大豆蛋白粉、明膠和乳清粉分別用SDS-PAGE電泳檢測，應(yīng)用凝膠圖像分析軟件分析電泳圖譜，結(jié)果表明SDS-PAGE可以檢測牛乳中摻入的乳源蛋白質(zhì)（乳清粉）和異源蛋白質(zhì)（明膠、大豆蛋白粉），其檢出限分別為4.4mg/mL、0.87mg/mL和0.79mg/mL。
　　 牛乳及摻假乳中蛋白的高效毛細管電泳分析應(yīng)用研究。毛細管電泳條件為未涂層的熔融石英毛細管，磷酸鹽緩沖液(p

6、H=2.5)，柱溫35℃，分離電壓26kV，紫外檢測波長214nm，在30min內(nèi)可以實現(xiàn)牛乳及摻假牛乳中蛋白質(zhì)的分離，5種主要乳蛋白在不同線性范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.997，各乳蛋白的遷移時間和峰面積的RSD分別小于0.34％和4.65％。通過牛乳混樣與不同比例的摻假乳（大豆分離蛋白，明膠，乳清蛋白）比較分析，可以確定出摻假蛋白的特征峰，可用于定性測定，樣品摻入30％的大豆分離蛋白、明膠、乳清粉溶液通過峰面積可以計算牛乳中摻假蛋