牛乳蛋白質(zhì)檢測(cè)試紙的研制.pdf

1、牛乳蛋白質(zhì)含量是評(píng)價(jià)牛乳品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)，在巨大經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，摻假兌水現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。牛乳增重?fù)剿畬?dǎo)致蛋白質(zhì)含量降低，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)凱氏定氮法檢測(cè)的是所有含氮類物質(zhì)，其中包括非蛋白類物質(zhì)。為掩蓋摻偽，不法商販添加尿素、銨鹽、三聚氰胺等非蛋白氮類物質(zhì)來蒙混過關(guān)。因此，一種經(jīng)濟(jì)快速的蛋白質(zhì)測(cè)定方法的建立顯得尤為重要。蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)方法主要有凱氏定氮法、光度法、色譜法、電泳法、滴定法等方法，但都存在有一定缺陷，主要問題有:或操作復(fù)雜，儀器設(shè)備

2、昂貴，成本高;或檢測(cè)靈敏度低;或無(wú)法辨別非蛋白氮類物質(zhì);或檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，需要專業(yè)人員。試紙法將化學(xué)反應(yīng)由試管里轉(zhuǎn)移到試紙上進(jìn)行，隨著適用于試紙法檢測(cè)的微型儀器的出現(xiàn)，試紙的半定量檢測(cè)逐漸轉(zhuǎn)化為精確的定量分析。因此，攜帶方便、操作簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)檢測(cè)試紙的研發(fā)具有重要的意義，配以便攜式檢測(cè)儀器還可以滿足定量檢測(cè)的需要。
　　本研究通過對(duì)比福林-酚試劑法、雙縮脲法、考馬斯亮藍(lán)三種方法檢測(cè)蛋白質(zhì)的線性范圍、精密度、相關(guān)性、靈敏度、準(zhǔn)確度等指標(biāo)

3、，綜合考慮牛乳樣品特性，確定利用雙縮脲原理進(jìn)行試紙的制作。應(yīng)用光電測(cè)色儀檢測(cè)試紙顏色，以顯色效果為指標(biāo)進(jìn)行試紙制備條件及使用條件的優(yōu)化，最終采用中厚度吸水紙為試紙制作載體，浸泡液為3倍雙縮脲標(biāo)準(zhǔn)試劑濃度，添加2％的Tween80，0.5％的無(wú)水乙醇，2％的聚乙烯吡咯烷酮，浸泡10min，60℃烘干30 min。使用時(shí)將試紙浸入牛乳樣品2s后25℃條件下反應(yīng)6 min，進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用試紙測(cè)定相同濃度乳白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、大豆分離蛋白

4、溶液，反光值無(wú)明顯差異，可見蛋白質(zhì)種類不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著影響，故選取酪蛋白配制系列濃度樣品，得蛋白質(zhì)含量與反光值的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)試紙法進(jìn)行評(píng)價(jià):相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在1.71～4.78％之間，回收率在94～99％之間。通過對(duì)巴氏殺菌乳、乳粉、UHT乳、生乳等不同乳樣品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果與國(guó)標(biāo)法無(wú)顯著差異。4℃密封保存3個(gè)月依舊可以正常使用，試紙穩(wěn)定性有待提高。制備的試紙具有操作簡(jiǎn)單、方便攜帶、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，配以自制的便攜式光電測(cè)