母愛剝奪對大鼠成年后行為和海馬5-HT1A受體的影響.pdf

1、背景:大量的臨床回顧性研究發(fā)現(xiàn),早期創(chuàng)傷性應(yīng)激事件,如年幼喪親、長期與父母分離以及兒童期受虐或忽視等,可增加成年后抑郁、躁狂、精神分裂癥等精神疾病的發(fā)病率。研究資料說明,單胺類神經(jīng)系統(tǒng)功能異常、下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-Pituitary-Adrenalaxis, HPA)的過度激活、腦內(nèi)炎性細胞因子的過度表達等可能參與早期應(yīng)激的過程。然而,由于臨床研究的周期長、生物材料難以獲得和人體研究的道德要求等局限性,生命

2、早期應(yīng)激的動物模型將為該領(lǐng)域的研究提供平臺。
　　目前被認可的應(yīng)用于嚙齒類動物的生命早期應(yīng)激是母愛剝奪模型,它能較好地模擬人類在生命早期母愛的喪失,并能觀察到成年后行為的改變。母愛剝奪模型主要分為兩種,第一種是短期的剝奪,如母子僅分離24小時;第二種是長期的剝奪,一般分為兩個階段:(1)母嬰分離階段(母乳期),(2)隔離飼養(yǎng)階段(斷乳后至成年)。其中母嬰分離相當(dāng)于人類在生命早期母愛的喪失,隔離飼養(yǎng)則相當(dāng)于人類在成年前社會交往行為的

3、減少或喪失。不多的母愛剝奪動物模型的研究報導(dǎo)了母愛剝奪對動物行為以及大腦神經(jīng)元再生、神經(jīng)生化改變的影響,母愛剝奪動物模型將為生命早期應(yīng)激的研究提供良好的研究平臺。
　　因此,本研究擬1、建立“生命早期母愛剝奪導(dǎo)致成年后行為異?！钡拇笫髣游锬Ｐ?從母愛剝奪的時機和強度、行為學(xué)檢測手段等方面,選擇有效的刺激條件和檢測指標(biāo);從海馬5-HT1A受體的表達方面分析生命早期母愛剝奪導(dǎo)致成年后行為異常的機制;在此模型上研究成年后母愛剝奪大鼠對慢

4、性應(yīng)激的行為學(xué)反應(yīng)以及對海馬5-HT1A受體表達的影響。
　　實驗一:
　　目的:以母愛剝奪為應(yīng)激手段,以自發(fā)活動和穿梭逃避為行為學(xué)檢測手段,建立生命早期的應(yīng)激模型。觀察新生大鼠母愛剝奪對成年后行為和海馬CA1區(qū)5-HT1A受體表達的影響。
　　材料和方法:實驗動物為3月齡雌雄Sprague-Dawley(SD)大鼠,合籠生產(chǎn)后,新生鼠按隨機數(shù)字表隨機分為母愛剝奪組和正常對照組,母愛剝奪組(38只):出生后第2-21天

5、給予每天母嬰分離1h;正常對照組(20只):出生后正常飼養(yǎng),不給予任何處理。觀察新生期母愛剝奪對大鼠成年(2月齡)后行為(自發(fā)活動和穿梭箱主動回避反應(yīng)的習(xí)得率的變化)的影響,并以免疫組化技術(shù)檢測海馬CA1區(qū)5-HT1A受體蛋白的表達。實驗結(jié)果用Excel2000和SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示,采用t檢驗(T-test)進行組間均數(shù)比較,P<0.05為差異顯著。
　　結(jié)果:
　　1.2

6、月齡時以開場試驗檢測大鼠的自發(fā)活動,比較母愛剝奪組與正常對照組大鼠自發(fā)活動的總路程、休息時間、中央路程以及周邊路程。結(jié)果表明,以上各項指標(biāo)均無顯著性差異(P>0.05),表明新生期母愛剝奪的大鼠剛剛進入成年期的自發(fā)活動與同齡正常大鼠無顯著差異。
　　2.2月齡時以穿梭試驗檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,比較母愛剝奪組與正常對照組大鼠主動回避反應(yīng)的習(xí)得率,結(jié)果表明二者無顯著性差異(P>0.05),表明新生期母愛剝奪的大鼠剛剛進入成年期的學(xué)習(xí)

7、記憶能力與同齡正常大鼠比較無明顯差異。
　　3.免疫組化結(jié)果顯示5-HT1A受體陽性細胞分布在海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體陽性細胞,新生大鼠母愛剝奪后滿2月齡時,大鼠海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體蛋白表達水平與Control組相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　實驗二:
　　目的:新生期接受母愛剝奪的大鼠成年后再次接受慢性應(yīng)激,觀察其對大鼠的自發(fā)活動、學(xué)習(xí)記憶以及海馬CA1區(qū)5-HT1A受體表達的影響。

8、r>　　材料和方法:母愛剝奪組(MD)和正常組(N)大鼠滿成年后,各分為2組,在2月齡時分為慢性應(yīng)激組和對照組,慢性應(yīng)激組接受10天慢性應(yīng)激,對照組正常飼養(yǎng),如此,四組動物分別為:母愛剝奪+慢性應(yīng)激(MD+S)、母愛剝奪+對照(MD+C)、正常大鼠+慢性應(yīng)激(N+S)、正常大鼠+對照(N+C)。以開場試驗和穿梭箱主動回避試驗檢測大鼠的行為變化,運用免疫組化技術(shù)對5-HT1A受體蛋白在海馬CA1區(qū)的表達進行分析。實驗結(jié)果用Excel200

9、0和SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(X±SE)表示,采用單因素方差分析(ANOVA)和t檢驗(T-test)進行組間均數(shù)比較,P<0.05為差異顯著。
　　結(jié)果:
　　1.無論是母愛剝奪大鼠還是正常大鼠,在2月齡時接受10天慢性應(yīng)激,與其對照組比較,開場試驗的總路程顯著減少(P<0.001)、休息時間均大幅度延長(P<0.01)、中央路程顯著地減少(P<0.01)。MD+S與N+S比較,總路程大幅度

10、的減少(P<0.001)、休息時間休息時間大幅度延長(P<0.01)、中央路程大幅度減少(P<0.01)。結(jié)果表明:慢性應(yīng)激可顯著地抑制大鼠的自發(fā)活動,而生命早期的母愛剝奪加重慢性應(yīng)激對自發(fā)活動的抑制作用。
　　2.無論是母愛剝奪大鼠還是正常大鼠,在2月齡時接受10天慢性應(yīng)激,與其對照組比較,主動回避反應(yīng)的習(xí)得率均有所降低(P<0.05)。MD+S與N+S比較,習(xí)得率顯著降低。結(jié)果表明:慢性應(yīng)激可抑制大鼠的的學(xué)習(xí)記憶能力,而生命早

11、期的母愛剝奪加重慢性應(yīng)激對學(xué)習(xí)記憶能力的抑制作用。
　　3.無論是母愛剝奪大鼠還是正常大鼠,在2月齡時接受10天慢性應(yīng)激,與其對照組比較,大鼠海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體蛋白表達水平均顯著減少,有顯著統(tǒng)計意義(P<0.05)。MD+S與N+S比較,大鼠海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體蛋白表達水平均顯著減少,有顯著統(tǒng)計意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:實驗結(jié)果顯示,母愛剝奪組子鼠每天從母鼠身邊移開3 h,當(dāng)子鼠返回時母鼠不